桥本甲状腺炎对子宫内膜雌激素受体α表达的影响

发布时间：2020-06-30 06:57

【摘要】：目的桥本甲状腺炎(HT)可以引起育龄女性受孕率下降,影响女性怀孕的因素很多,雌激素受体是其中之一。因此本课题通过对NOD雌性小鼠注射猪甲状腺球蛋白(p Tg)建造HT模型,检测动情周期,观察HT小鼠动情期子宫内膜的雌激素受体α表达是否受到影响,同时检测子宫局部细胞因子水平了解HT子宫的局部免疫,探讨HT对怀孕的影响。方法选取30只健康的NOD小鼠,统一为8~9周龄、雌性、清洁级标准。喂养一周后,将30只NOD小鼠随机分成2组:正常对照(CON)组和桥本甲状腺炎(HT)组各15只。以下为HT组造模的操作步骤:倒出100μl的PBS溶液,向里面加入25μg的猪甲状腺球蛋白p Tg,p Tg溶液与弗氏完全佐剂(CFA)混合于研钵中,二者比例为1:1。冰浴条件下研磨至完全乳化。固定小鼠,在其尾根部1cm处皮下注射0.1 ml乳化剂。在正常对照组需要注射相等量的CFA。两周后用同样的方法将弗氏不完全佐剂(IFA)替换掉模型组CFA,对照组小鼠等量IFA注射。造模周期49天。取甲状腺标本,做HE染色并拍摄图片。取小鼠血清,检测甲状腺球蛋白抗体(Tg Ab)、甲状腺激素(T3、T4),甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)及TSH。免疫组织化学染色法检测小鼠子宫内膜雌激素受体α的分布和表达。小鼠子宫雌激素受体α和IL-6,IL-10 m RNA含量用PCR检测,瑞士染色检测小鼠动情周期。小鼠子宫IL-10和IL-6用流式液相多重蛋白定量技术(CBA)检测。结果1.小鼠甲状腺标本描述:与CON组相比HT组小鼠的甲状腺增大。甲状腺组织颜色呈淡红色,质地触之较韧。甲状腺HE染色:与CON组相比,HT组小鼠可见甲状腺内有淋巴细胞浸润,部分破坏的甲状腺滤泡。2.小鼠甲状腺激素水平:较CON组相比,HT组TSH,T3,T4差异无统计学意义。小鼠抗体水平与CON组相比,HT组小鼠血清Tg Ab升高(P0.001),TPOAb升高(P0.05);3.免疫组化结果:CON组和HT组动情期子宫内膜均存在免疫阳性物质表达。子宫内膜上腔上皮、腺上皮及基质都有ERα的表达。CON组子宫内膜ERα水平显著高于HT组(P0.05)。4.PCR结果:HT组小鼠动情期子宫ERαm RNA水平低于CON组(P0.001);IL-6和IL-10 m RNA水平均为HT组低于CON组表达(P0.001)。5.瑞氏染色结果描述:基本都是有核上皮细胞,夹杂少量角化上皮细胞的为动情前期;大而角化的无核细胞居多,间有少许有核上皮细胞的是动情期;角化上皮细胞,白细胞,有核上皮细胞都可看到的为动情后期;有大量的白细胞,存在少上皮细胞的为动情间期。6.CBA法测小鼠子宫IL-6及IL-10结果与CON组比,HT组IL-6水平减低(P0.05),IL-10水平减低(P0.001)。结论HT会导致小鼠动情期子宫内膜ERα表达下降,子宫局部IL-6及IL-10水平发生变化。本实验的结果可能对HT影响怀孕的探讨有一些参考意义。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R581.4
【图文】：

肉眼,甲状腺,正态性检验,统计学意义

理像用 IPP6.0 图像分析软件分析；PCR 结果用 2-软件进行本实验数据分析。进行正态性检验和方 x s表示。单个变量的两组资料之间比较采用。以 P<0.05 为差异有统计学意义。正常小鼠的甲状腺组织标本腺分为左侧叶，右侧叶和峡部，形态不太规则，淡红，正常对照组甲状腺符合正常小鼠甲状腺外，触之质地较韧。

小鼠血清,空白,黑色,水平检测

图 2 两组小鼠甲状腺的 HE 染色图片 ×50（见图中%急晔荆〢：正常对照组；B：桥本组；Fig 2 HE staining of thyroid tissue in two groups ×50 (be marked byA: Normal control group; B: HT group;.3 两组小鼠血清激素水平两组小鼠血清 T3、T4、TSH 水平检测结果：正常对照组和 HT较为接近，差异无统计学意义，HT 组 T4 水平比正常对照组要高差异无统计学意义，TSH 在 HT 组稍微低于正常对照组，两组间统计学意义。见图 3。A

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