IL-33通过诱导AAM分化缓解痛风炎症

发布时间：2020-06-30 20:43

【摘要】：研究背景痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)是一种常见病,常常是因为嘌呤代谢紊乱或者有尿酸排泄不良引起的以血尿酸增多为特征的一种急性非感染性炎性反应。发病人群以中老年男性患者居多,年龄越大,患病率也就越高,男性患者数量多于女性。痛风性关节炎以急性起病为特征,初次发作多数人在第一跖趾关节出现炎性症状,一天之内红肿热痛功能障碍等炎症反应可达到高峰,但一般在发作1-2周后自行缓解,痛风性关节炎如果长期反反复复发作,有可能导致关节畸形、肾功能衰竭、肾结石等相关疾病,使患者生活质量大幅下降。最近几十年,痛风性疾病在我过的发病率越来越高,并且患者的年龄也有年轻化的趋势。IL-33(interleukin-33),是近些年发现的一种细胞因子,属于IL-1细胞因子超家族,因为结构酷似IL-18而被发现。IL-33的受体为ST2(ILIRL1),IL-33与ST2结合之后,相互作用,可招募下游的信号分子,例如MyD88,然后激活NF-kB、MAPK信号通路,从而激活胞外信号调节激酶1/2和p38丝裂原活化蛋白激酶,使得2型细胞因子,如IL-4、IL-5和IL-13的分泌增加,从而诱发Th2型免疫应答。前期的研究发现,在痛风患者的外周血和关节中,IL-33表达水平明显增加,并且在痛风模型小鼠的相关实验中也证实了IL-33有助于缓解MSU导致的痛风发作,但是具体的缓解机制尚不清楚。随后我们通过进一步的研究发现,IL-33参与了痛风患者的脂质代谢的调节,并起到了保护肾功能的作用。有文献报道,替代性活化巨噬细胞(alternatively activated macrophage,AAMs or M2)与脂质代谢有密切关系,并且还参与痛风自发缓解。我们推测IL-33可能通过诱导AAM分化参与痛风的缓解。研究目的明确IL-33是否通过诱导AAM参与痛风缓解。研究方法1.通过体外用小鼠骨髓细胞诱导巨噬细胞分化而得到小鼠巨噬细胞后,分别用予以IL-4、IL-13和IL-33细胞因子单独处理或和IL4+IL-33或IL-13+IL-33联合处理48小时后,流式细胞术观察AAM细胞的数量。2.利用C57BL/6小鼠为模型,分别腹腔内注射IL-33或者PBS,连续注射两天,第三天处死小鼠,流式检测小鼠腹腔灌洗液细胞,观察AAM细胞的变化;ELISA检测方法,测定模型鼠腹腔灌洗液中的细胞因子IL-4、IL-5以及IL-13水平的改变。3.以C57BL/6小鼠为模型,背部制作气囊模型。在气囊模型制成前提前三天起给实验组小鼠腹腔内注射IL-33,2ug/只,对照组腹腔注射等体积PBS,气囊模型建成时再注射一次IL-33或PBS,随后向小鼠气囊内注射MSU,3mg/只,建立小鼠急性痛风模型。在注射MSU后16小时处死小鼠,收集小鼠气囊及腹腔灌洗液,流式检测灌洗液中AAM、中性粒细胞,观察实验组与对照组的差异。实验结果1.IL-33在体外与IL-4和IL-13起协同作用,间接促进巨噬细胞向AAM的分化。2.小鼠腹腔注射IL-33细胞因子可诱导腹腔灌洗液中F4/80和CD206双阳性的AAM细胞数量增加。3.痛风气囊模型小鼠腹腔注射IL-33细胞因子可以诱导气囊和腹腔灌洗液中F4/80和CD206双阳性AAM细胞增加,同时抑制MSU诱导的中性粒细胞浸润。结论外源性IL-33可诱导巨噬细胞分化为AAM细胞,可能通过诱导AAM数量细胞增加而缓解痛风性炎症反应。
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R589.7
【图文】：

尿酸盐,内毒素测定

第三章实验结果逡逑尿酸盐的制备及内毒素检测逡逑尿酸盐的制备逡逑定量的尿酸后加入ｄｄＨ２０，制成悬浊液，然后加入ＮａＯＨ，微波，帮助尿酸溶解并与氢氧化钠发生反应，随后将反应后的溶液滤器过滤除菌后，加入无菌的ＮａＣＩ溶液，调整尿酸盐溶液的ＰＨ以析出，此时溶液中出现白色絮状的尿酸盐。之后通过离心的方的尿酸盐沉淀在离心管底部，弃去上清液后，用无水乙醇洗涤超净台内风Ｔ、粉碎成粉末状后分装保存于－２０°Ｃ冰箱内。取少偏振光显微镜下可以观察到针状的结晶，如图３．１．１所示。逡逑

细胞,百分比,流式细胞术分析,统计学意义

逑ＰＢＳ组ＡＡＭ细胞百分比。此外，结合ＡＡＭ细胞百分比以及腹腔灌洗液细胞逡逑计数的总数，可以计算出两组数据中ＡＡＭ的细胞总数。结果如图３．３．２．２所示，逡逑ＩＬ－３３组的ＡＡＭ细胞数显著高于ＰＢＳ组，Ｐ＜０．０１具有统计学意义。逡逑Ａ邋ＰＢＳ逦ＩＬ－３３逡逑１逦ｉ逡逑；２．４８逦a麇澹卞危玻叮稿危矗叮插澹赍义希翦澹礤澹椋撸撸矗蓿澹垮澹掊义希麇文獭㈠危徨危橐唬诲五危危掊义希蹂澹矗罚甦珏濉常保卞危辏玻卞錦lＶ邋：暴９．７逡逑．．．．．．４邋二，ｄ逦ｊ逡逑＿逦——＾邋Ｆ４／８０逡逑图３．２．１．１流式细胞术分析小鼠腹腔细胞ＣＤ２０６和Ｆ４／８０双阳性细胞代表ＡＡＭ逡逑细胞逡逑Ｆｉｇ３．２．１．１：Ｔｏ邋ｃｏｎｆｒｍ邋ｔｈｅ邋ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ＩＬ－３３邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ邋ｏｆ邋ＡＡＭ

【参考文献】