TAT-SOD的性质表征及其辅助降血糖效果的研究

发布时间：2020-07-02 22:09

【摘要】：糖尿病及其并发症严重影响着人们的健康,氧化应激被认为是糖尿病及其并发症发病机理的共同途径。超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)是机体中最重要的抗氧化酶,可期在糖尿病治疗中发挥着重要的作用。但由于SOD是大分子蛋白质,细胞膜通透性差,只能清除胞外的自由基,这限制了SOD在临床上的使用。TAT-SOD是TAT蛋白转导结构域与SOD的融合蛋白,可望改善以上问题,所以本文在实验分析TAT-SOD理化特性的基础上,对比研究了TAT-SOD与天然SOD的辅助降血糖效果。本实验通过测定TAT-SOD对不同温度、pH以及对胃蛋白酶的稳定性,来研究TAT-SOD的理化性质。然后对比分析相同剂量的天然牛血SOD和TAT-SOD、不同剂量的TAT-SOD以及TAT-SOD的灌胃和灌嘴不同给药方式,分别对Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病模型大鼠的体重、血糖、口服糖耐量(OGTT)、组织(包括心、肝、肾、胰腺、脾、骨骼肌)SOD、血浆胰岛素(INS)、胰高血糖素(GLUCA)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、丙二醛(MDA)、糖化白蛋白(GA)和血脂水平的影响。研究结果表明,SOD和TAT-SOD对Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病模型大鼠均有着显著的辅助降血糖效果,TAT-S OD(中)剂量组最好。对Ⅰ型糖尿病治疗结果发现,TAT-SOD控制体重和血糖效果明显好于SOD(P0.05);而在OGTT试验中,二者效果相当;TAT-SOD组与SOD组的肝脏SOD酶活水平相当,但肾脏SOD酶活水平前者明显高于后者;血浆生化水平,SOD和TAT-SOD都可以提高INS和AMPK水平,降低MDA水平TAT-SOD好于SOD。对Ⅱ型糖尿病治疗结果发现,在体重控制上TAT-SOD与SOD相当;但是血糖控制、OGTT上TAT-SOD好于SOD(P0.05),且TAT-SOD显著降低了GA水平(P0.05);SOD和TAT-SOD都可以降低MDA和GLUCA,改善INS方面TAT-SOD好于SOD;在血脂控制水平方面,TAT-SOD不但显著提高高密度脂蛋白水平(P0.05),而且降低总胆固醇和甘油三酯水平含量(P0.05)。灌胃效果与灌嘴相当,说明在不同给药方式下,TAT-SOD都可以起到辅助降低血糖疗效。这些结果说明SOD和TAT-SOD都具有明显辅助降血糖效果,且TAT-SOD的总体效果好于SOD。这些效果可能是基于TAT-SOD与SOD对消化道的抗氧化作用,TAT蛋白转导结构域进一步提高了SOD的这种抗氧化作用。
【学位授予单位】：福州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R587.1
【图文】：

ＳＯＤ、不同剂量的ＴＡＴ－ＳＯＤ以及ＴＡＴ－ＳＯＤ的灌胃和灌嘴不同给药方式，即分别逡逑探宄不同给药药物、给药剂量及给药方式对Ｉ型和ＩＩ型糖尿病模型大鼠的治疗效逡逑果，实验主要研宄内容如图１－３所示。逡逑９逡逑

收率为７２．９２％。逡逑为进一步验证其纯度，分别取ＴＡＴ－ＳＯＤ发酵液及乙醇沉淀样品进行ＳＤＳ－逡逑ＰＡＧＥ分析，结果如图３－】所示。经过４５％乙醇沉淀后，可以去除发酵液中部分逡逑高分子量杂蛋白，得到较纯的蛋白质，分子量为２５ｋＤａ邋（图３－１箭头处），蛋白逡逑分子量大小符合预期结果。逡逑逦表３－１邋ＴＡＴ－ＳＯＤ融合蛋白纯化表逦逡逑样品逦总体积邋酶活力逦总酶活力蛋白含量蛋白比活蛋白纯化邋回收率逡逑逦（ｍＬ）逦（Ｕ／ｍＬ）逦（Ｕ）逦（ｍｇ／ｍＬ）逦（Ｕ／ｍｇ）逦倍数逦（％）逡逑发酵液逦４０逦１３３５４逦５３４１６０逦１．７６逦７５８７．５逦１逦１００逡逑乙醇沉淀逦４逦９７３７５逦３８９５００逦４．９逦１９８７２．４５逦２．６逦７２．９２逡逑９７．２塷逡逑６６－４－＾Ｂ逡逑４４．３．逡逑２０．卜＿囊逡逑ｕｖＢＷ逡逑１逦２逦３逡逑图３－１邋ＴＡＴ－ＳＯＤ融合蛋白乙醇沉淀ＳＤＳ－ＰＡＧＥ

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本文编号：2738748