短肽FLPNF对地塞米松诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用

发布时间：2020-07-08 04:31

【摘要】：目的:研究短肽FLPNF对地塞米松诱导的胰岛β细胞凋亡和细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌功能下降的影响及其发挥作用的可能分子学机制。方法:以大鼠胰岛β细胞系INS-1细胞株为研究对象,分为空白对照(Control)组、DEX组、FLPNF组、FLPNF+DEX组、Ghrelin组、Ghrelin+DEX组、NFGAIL组、NFGAIL+DEX组;CCK-8法检测细胞活力;TUNEL染色法及Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况,统计细胞凋亡率;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3的表达情况;ELISA法检测细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌功能;Western blot法检测葡萄糖转运蛋白Glut2的表达情况;Graph Pad Prism5.0软件统计分析所检测各项指标的数据,p0.05为差异有统计学意义。结果:短肽FLPNF单独作用下,INS-1细胞的增殖活力及状态未发生明显改变,细胞凋亡率及凋亡相关蛋白未见明显变化,葡萄糖转运相关蛋白Glut2的表达未明显增加,葡萄糖刺激的胰岛素分泌量未见明显变化;地塞米松单独作用下,INS-1细胞的细胞活力降低、细胞损伤明显,可以观察到核皱缩破裂,细胞凋亡密度较高,凋亡率可达(40.6±2.4)%,凋亡相关蛋白Bcl-2的表达明显降低,Bax、cleaved Caspase-3的表达明显升高,葡萄糖刺激的胰岛素分泌量降低,葡萄糖转运相关蛋白Glut2的表达明显降低,地塞米松明显增加了INS-1细胞的凋亡并导致INS-1细胞的葡萄糖刺激胰岛素分泌功能明显下降;在地塞米松联合短肽FLPNF后,INS-1细胞的细胞活力提高、细胞状态明显改善,细胞凋亡密度明显下降,凋亡率降低至(27.2±2.0)%(p0.001),凋亡相关蛋白Bcl-2的表达明显上调,Bax、cleaved Caspase-3的表达明显下调,葡萄糖刺激胰岛素分泌功能增强,葡萄糖转运相关蛋白Glut2的表达显著上调,短肽FLPNF明显降低地塞米松诱导的INS-1细胞凋亡并改善了细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌功能;作为阳性对照肽的Ghrelin组,单独作用下INS-1的各项指标未见明显变化,与地塞米松联合应用时,相比DEX组,INS-1细胞的细胞活力提高、凋亡率降低,Bcl-2表达明显提高,Bax、cleaved Caspase-3的表达明显降低;作为阴性对照的非相关短肽NFGAIL,单独作用下INS-1细胞各项指标未见明显变化,联合地塞米松应用时,INS-1细胞的凋亡相关蛋白表达与地塞米松单独作用时的表达未见明显改变,细胞的凋亡密度较地塞米松单独作用下稍有增加。结论:短肽FLPNF通过上调Bcl-2的表达、下调Bax及cleaved Caspase-3的表达,明显降低地塞米松诱导的胰岛β细胞凋亡;同时,短肽FLPNF通过上调Glut2表达,改善了胰岛β细胞的葡萄糖刺激胰岛素分泌功能。综上,短肽FLPNF对地塞米松诱导的胰岛β细胞凋亡具有明显的保护作用。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R587.1
【图文】：

图 1 CCK-8 法测定各组 INS-1 细胞增殖活性药物不同处理顺序对 INS-1 细胞活力的影响，数据以均数±标准差法和 LSD 法用于研究的组间比较；***，与 DEX 组相比，p 组相比，p ＜0.01；Δ，与 DEX48h+FLPNF72h 组相比，p ＜0.对 INS-1 细胞活力的影响，数据以均数±标准差表示（n=3）；单因研究的组间比较：***，与 DEX 组相比，p ＜0.001；#，与 FLP.05。C，代表短肽 FLPNF 与对照肽对 DEX 作用下 INS-1 细胞活力表示（n=3）；单因素方差分析法和 LSD 法用于研究的组间比较0.001；###，与 DEX 组相比，p ＜0.001；##，与 DEX 组相比， FLPNF 对 INS-1 细胞凋亡的影响L 法检测细胞凋亡的结果中，Control 组中较少见到细胞凋FGAIL+DEX 组中细胞凋亡密度最高，可见核碎裂，二者无

2 TUNEL 法检测短肽 FLPNF 抗地塞米松诱导的 INS-1 细胞凋亡的作用 ×40NS-1 细胞用 TUNEL 染色并在倒置荧光显微镜下拍照。B，统计分析凋亡细胞数，±标准差表示（n=3）；单因素方差分析法和 LSD 法用于研究的组间比较：**，与 Contrp ＜0.01；***，与 Control 组相比，p ＜0.001；##，与 DEX 组相比，p ＜0.01。exin V-FITC/PI 法检测细胞凋亡的结果与 TUNEL 法检测细胞凋亡的结果基Control 组细胞凋亡率较低，DEX 组和 NFGAIL+DEX 组细胞凋亡率显著升0.001)，且可见早期凋亡散点密度与晚期凋亡散点密度均有升高；Ghrelin 组组、NFGAIL 组较 Control 组无明显差异(p ＞0.05)；Ghrelin+DEX 组及DEX 组的细胞凋亡率比 DEX 组有明显降低(p ＜0.001)。(图 3)

图 3Annexin V-FITC 流式法检测 INS-1 细胞凋亡-1 细胞用 AnnexinV-FITC 试剂和 PI 试剂双重染色后，通过流式细散点图。B，细胞凋亡率的统计分析结果，以均数±标准差表示（LSD 法用于研究的组间比较： ***，与 Control 组相比，p ＜0.00.01；Δ，DEX+FLPNF 组与 DEX+Ghrelin 组相比，p ＜0.01。 FLPNF 对 INS-1 细胞凋亡相关蛋白 Bcl-2、Bax 和3 表达的影响的 Bcl-2 表达水平较 Control 组明显降低(p ＜0.05)，经过PNF+DEX 组的 Bcl-2 表达水平明显升高(p ＜0.05)；同时平明显高于 Control 组(p ＜0.05)，而 FLPNF+ DEX 组的明显降低(p ＜0.05)。(图 4)

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本文编号：2746096