尘螨特异性免疫治疗减轻哮喘小鼠氧化应激及气道上皮细胞凋亡的机制研究

发布时间：2020-07-11 21:02

【摘要】：目的:目前很多实验研究表明氧化应激以及细胞凋亡在哮喘发病的过程中起着重要的作用,而特异性免疫治疗(Special Immunologic Therapy,SIT)是治疗哮喘的唯一根治性治疗方法,因此本实验旨在探讨尘螨特异性治疗在减轻哮喘气道细胞凋亡以及气道氧化应激中的作用以及其机制的研究。方法:本实验分为动物部分和细胞部分。动物实验:将32只6-8周龄Balb/C小鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、SIT组、N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)组。哮喘组、SIT组、NAC组用尘螨粗提液进行致敏,SIT组和NAC组在小鼠滴鼻激发之前进行治疗干预。对照组的操作给予PBS处理。激发后24h内进行气道高反应性检测,之后将小鼠处死并采集标本。行肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中ROS(Reative Oxygen Species)以及细胞因子的检测,肺组织HE染色(Hematoxylin-eosin staining),PAS染色(Periodic Acid-Schiff,PAS),TUNEL凋亡实验。肺组织冰冻切片检测活性氧ROS,肺组织匀浆检测细胞因子以及MDA,流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测Treg细胞(Regulatory T Cells)。细胞实验:分为对照组,IL-25低浓度组,IL-25高浓度组,将重组人IL-25加入细胞培养皿中刺激细胞,分别在12h和24h收集细胞行细胞凋亡实验Annexin V-PI(AV-PI)以及流式检测ROS实验。结果:1.动物实验:(1)气道高反应性的检测:哮喘模型组中的小鼠气道反应性较于正常组小鼠有明显的增高,而SIT组和NAC组小鼠气道反应性较哮喘组中小鼠有所减轻。(2)肺泡灌洗液炎症细胞计数:SIT组和NAC组炎症细胞总数以及少于哮喘组,其中嗜酸性粒细胞比例小于哮喘组。(3)HE染色:SIT组和NAC组小鼠肺组织中炎性细胞浸润较哮喘组小鼠有明显减轻。(4)PAS染色:SIT组和NAC组小鼠气道粘液分泌较哮喘小鼠有所减轻。(5)TUNEL染色:SIT组和NAC组小鼠肺组织以及气道细胞凋亡细胞明显较哮喘组小鼠有所减少。(6)s Ig G1,s Ig E以及细胞因子ELISA:尘螨特异性免疫治疗则明显降低了s Ig G1,s Ig E,IL-4,IL-5,IL-13,IL-25的含量。(7)MDA(丙二醛)检测:哮喘小鼠肺组织MDA含量明显升高,而尘螨特异性免疫治疗和NAC组明显降低肺组织中脂质氧化产物MDA的含量。(8)肺泡灌洗液ROS检测:哮喘组小鼠肺泡灌洗液细胞中ROS明显增多,而SIT组以及NAC组明显减少了BALF中的ROS生成(9)流式检测Treg细胞:SIT治疗的哮喘小鼠Treg细胞数量相较于正常PBS组和哮喘模型组小鼠有显著的增多。第二部分:细胞实验:(1)Annexin V-PI(AV-PI)凋亡细胞检测:IL-25可以明显上调16HBE人气道上皮细胞的凋亡。(2)流式检测ROS:IL-25能够刺激16HBE人气道上皮细胞ROS的生成。结论:第一部分动物实验:1尘螨特异性免疫治疗可以减轻哮喘小鼠气道高反应哮喘症状,降低s Ig E水平,并可能通过下调Treg细胞减轻哮喘小鼠肺组织的炎症浸润。2.尘螨特异性免疫治疗可以下调一系列炎性细胞因子的表达,可以下调IL-25的表达。3.尘螨特异性免疫治疗可以减轻哮喘小鼠肺组织氧化应激以及肺组织细胞的凋亡。第二部分:细胞实验:1.IL-25细胞因子可以诱发HBE细胞的氧化应激反应。2.IL-25细胞因子可以诱导16HBE细胞的凋亡。
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562.25

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本文编号：2750925