Klotho通过NF-кB信号通路抑制地塞米松诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡
发布时间：2020-07-15 09:36
【摘要】：目的:探究klotho(克老素,KL)通过何种机制来改善地塞米松(dexamethason,DEX)对MC3T3-E1成骨细胞的抑制作用。方法:首先采用倒置荧光显微镜观察含Klotho基因(Ad-KL)重组腺病毒和含绿色荧光蛋白基因(Ad-GFP)的重组腺病毒在MC3T3-E1细胞中的转染效率,并用Western blot检测KL蛋白表达水平。CCK-8检测各组细胞的存活率,流式细胞术和Western blot分析NF-кB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组跟各组间的关系;通过Western blot和qPCR对各组凋亡蛋白和NF-κκB通路相关蛋白的表达情况进行检测;激光共聚焦检测IκB蛋白表达情况及NF-кB p65核移位。结果:MC3T3-E1细胞成功被Ad-KL转染,且KL蛋白可以在细胞中高效表达。通过CCK-8及Western blot发现DEX诱导成骨细胞凋亡且cleaved caspase-3蛋白表达明显增加,而KL预处理后凋亡细胞数量较前明显减少且cleaved caspase-3蛋白表达下降。PDTC可使DEX诱导的凋亡细胞数减少并减弱DEX诱导的caspase-3增加。KL能够通过减少DEX诱导的IκB降解,NF-кB p65的核移位和p65的磷酸化来降低DEX诱导的MC3T3-E1细胞凋亡并同时减少caspase-3的表达。结论:KL能通过抑制NF-κB途径来改善DEX诱导的MC3T3-E1细胞凋亡。除此之外,KL还有可能通过其他信号通路来改善DEX诱导的MC3T3-E1细胞凋亡,具体如何尚需要进一步研究。本研究结果表明,KL有可能是未来防治糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)的新靶点。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R580
【图文】：
d-KL 和 Ad-GFP 转染 MC3T3-E1 细胞及转染后 KL 蛋白表达水平情况（ransfection of MC3T3-E1 cells withAd-KLand Ad-GFP, and KL protein elevels post-transfection（×200）使用免疫荧光显微镜观察分别用 Ad-GFP 和 Ad-KL 转染 24 小时和 48 小片，200×）;（B）通过蛋白印迹检测 KL 蛋白与β-actin 的相对表达水平，升高。 数据是三次独立实验的平均值，表示为平均值±SEM。 ** p<0.05 Cells transfected with Ad-GFP and Ad-KL for 24 h and 48 h were obsuorescence microscopy (All figures, are magnified 200×)；(B) The relativ
图 2 MC3T3-E1 细胞的存活率在不同 DEX 浓度下的影响t of different concentrations of DEX on the cytotoxicity o 4 mmol·L-1DEX 预处理 MC3T3-E1 细胞 24 小时。使用 4 mmol / L DEX 处理显着降低活细胞群数值是平均值±比，*p<0.05，**p<0.01 和***p<0.001。
图 3 KL 对 DEX 诱导的 MC3T3-E1 细胞凋亡的影响Fig.3 Effect of KL on DEX-induced apoptosis in MC3T3-E1 cells（A）通过 Western blot 检测 caspase-3 和 cleaved caspase-3 的蛋白表达水平及其蛋白表定量分析。（B）通过 RT-qPCR 检测 caspase-3 mRNA 的表达水平。（C）用相应分组处胞后，用 CCK-8 法测量 MC3T3-E1 细胞的存活率。数据是三次独立实验的平均值±SEM
本文编号：2756317
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R580
【图文】：
d-KL 和 Ad-GFP 转染 MC3T3-E1 细胞及转染后 KL 蛋白表达水平情况（ransfection of MC3T3-E1 cells withAd-KLand Ad-GFP, and KL protein elevels post-transfection（×200）使用免疫荧光显微镜观察分别用 Ad-GFP 和 Ad-KL 转染 24 小时和 48 小片，200×）;（B）通过蛋白印迹检测 KL 蛋白与β-actin 的相对表达水平，升高。 数据是三次独立实验的平均值，表示为平均值±SEM。 ** p<0.05 Cells transfected with Ad-GFP and Ad-KL for 24 h and 48 h were obsuorescence microscopy (All figures, are magnified 200×)；(B) The relativ
图 2 MC3T3-E1 细胞的存活率在不同 DEX 浓度下的影响t of different concentrations of DEX on the cytotoxicity o 4 mmol·L-1DEX 预处理 MC3T3-E1 细胞 24 小时。使用 4 mmol / L DEX 处理显着降低活细胞群数值是平均值±比，*p<0.05，**p<0.01 和***p<0.001。
图 3 KL 对 DEX 诱导的 MC3T3-E1 细胞凋亡的影响Fig.3 Effect of KL on DEX-induced apoptosis in MC3T3-E1 cells（A）通过 Western blot 检测 caspase-3 和 cleaved caspase-3 的蛋白表达水平及其蛋白表定量分析。（B）通过 RT-qPCR 检测 caspase-3 mRNA 的表达水平。（C）用相应分组处胞后，用 CCK-8 法测量 MC3T3-E1 细胞的存活率。数据是三次独立实验的平均值±SEM
【参考文献】
相关博士学位论文 前1条
1 李福春;TRPV5/TRPV6对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化及成骨细胞信号传递的影响[D];吉林大学;2008年
本文编号：2756317
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