高脂和糖尿病大鼠血清T、睾丸ABP及INHB表达水平改变分别对生精功能的影响

发布时间：2020-07-24 15:52

【摘要】：目的:建立血脂异常以及2型糖尿病的中年雄性Sprague-Dawlay(SD)大鼠模型,探讨高脂和2型糖尿病对生殖系统的影响关系的研究。本研究通过建立高脂血症和糖尿病大鼠模型,研究睾丸形态学HE染色、睾丸ABP、INHB表达水平改变、血清T水平,探讨高脂血症和糖尿病对生精功能的影响,及其可能的机制。方法:挑选无特定病原体(SPF级),健康雄性SD大鼠60只,每只通过统计软件进行编号后,随机编成A、B、C三个实验组:A对照组(n=15)、B高脂组(n=15)、C糖尿病组(n=30)。A对照组(n=15),用普通饲料饲养;B高脂组(n=15),用高脂饲料饲养;C糖尿病组(n=30),用高脂饲料饲养24w后,腹腔注射20mg/kg STZ,对照组和高脂组均予以等量的柠檬酸注射液代替;从实验开始到36w末,分别检测每组大鼠的体重、血糖、血清甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、胰岛素浓度,并剔除未成模大鼠。造模成功后,处死各组造模成功的大鼠,在颈动脉处采血,离心取血清,检测各组大鼠血清的T水平;立即分离每一组大鼠其中一侧睾丸组织,全部浸泡在Bouin固定液里,在室温条件下,储存48 h后,送广西医科大学免疫组化实验中心,对睾丸标本进行包埋以及切片。取对侧睾丸组织行以下研究,(1)睾丸组织切片HE染色,用OLYMPUS BX53显微镜和软件检测观察睾丸组织结构形态学变化,生精细胞数目;(2)分别采用免疫组化方法、Western Blot检测三组大鼠睾丸ABP及INH B蛋白表达差异。收集并整理全部实验所获得数据后,采用SPSS 17.0统计分析软件分析所获得的实验数据,采用P0.05来作为实验数据是否有统计学差异的评判标准。结果:(1)对三组大鼠的体重进行比较,对照组体重最重,高脂组则次之,糖尿病组最轻;高脂组和糖尿病组高密度脂蛋白、血清胆固醇、低密度脂蛋白及甘油三酯较对照组升高;高脂组和糖尿病组的放免法测空腹血糖、稳态胰岛素抵抗指数较对照组升高,而糖尿病组的放免法测空腹血糖、稳态胰岛素抵抗指数较高脂组升高;糖尿病组的空腹血糖较对照组及高脂组升高;高脂组与对照组的空腹血糖未升高,无统计学意义。以上的代谢数据表明高脂及糖尿病模型大鼠造模已经成功;(2)HE染色结果与对照组相比,高脂组和糖尿病组大鼠睾丸生精小管基膜不完整,厚薄程度不均一,生精上皮基膜与支持细胞连接较为疏松,生精细胞排列疏松混乱,间隙变宽,层数减少,数量明显减少(P0.05);(3)ABP、INH B及T表达结果与对照组相比,高脂组大鼠睾丸ABP表达明显增多(P0.05)、INH B表达明显减少(P0.05),糖尿病组大鼠睾丸ABP及INH B表达均明显减少(P0.05),高脂组和糖尿病组模型大鼠的血清T水平均明显降低(P0.01);与高脂组相比,睾丸ABP及INH B表达均明显减少(P0.05),糖尿病组大鼠的血清T水平均明显降低(P0.01)。结论 高脂血症及糖尿病可能通过破坏睾丸组织正常结构,降低T合成分泌、高脂可使ABP表达增多、INH B表达减少,糖尿病可使ABP及INH B表达均减少,导致生精功能障碍。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R587.1;R589.2
【图文】：

对照组 高脂组 糖尿病组图 3-1 三组大鼠睾丸 HE 染色光镜下图片（X200，X400）Figure 3-1 The HE staining light microscopy pictures of testis in three groups of rats(X200，X403.3 免疫组化三组大鼠免疫组化实验结果显示，ABP 及 INHB 蛋白的阳性表达产为棕红色或者棕黄色，每一组标本图片背景清晰，染色较好。ABP 及 IN蛋白主要在睾丸各级生精细胞胞浆中表达，其余细胞及细胞核未见明显达。每一组大鼠睾丸组织的各级生精细胞的细胞核免疫组化染色主要为色，各级生精细胞胞质、精子头、体与尾部及睾丸支持细胞中均未观察ABP 及 INHB 蛋白的表达。对照组大鼠睾丸组织 ABP 及 INHB 蛋白的棕色或者棕红色阳性染色及分布均匀；高脂组大鼠睾丸组织 ABP 棕黄色或

高脂和糖尿病大鼠血清 T、睾丸 ABP 及 INH B 表达水平改变及对生精功能的影响 2018 届硕士学位论0.05）；与对照组相比，糖尿病组 ABP 及 INHB 表达量均显著降低，二均有差异统计学意义（P<0.05）；与高脂组相比，糖尿病组 INHB 表达量显降低（P<0.05），有差异统计学意义。（见图 3-2、图 3-3、表 3-2、图 3

0.05）；与对照组相比，糖尿病组 ABP 及 INHB 表达量均显著降低，二均有差异统计学意义（P<0.05）；与高脂组相比，糖尿病组 INHB 表达量显降低（P<0.05），有差异统计学意义。（见图 3-2、图 3-3、表 3-2、图 3-对照组 高脂组 糖尿病组图 3-2 三组大鼠睾丸组织 ABP 蛋白的免疫组化表达示意图（×400）Figure 3-2 The Expression of Immunohistochemical forABP Protein in Testis of Three Groups

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