过继免疫γδT细胞和雾化吸入母牛分枝杆菌对哮喘小鼠气道炎症和细胞因子的影响

发布时间：2020-07-28 15:21

【摘要】：第一部分雾化吸入注射用母牛分枝杆菌调控γδT细胞对哮喘小鼠的影响目的:通过提取经雾化吸入注射用母牛分枝杆菌干预的TCR-β-/-小鼠的γδT细胞过继免疫治疗哮喘小鼠,探讨注射用母牛分枝杆菌是否通过调控γδT细胞影响哮喘小鼠的气道炎症及影响下游细胞因子IL-4、IFN-γ。方法:按随机数字表法将40只雄性Balb/c小鼠分为4组:正常组(A)、哮喘组(B)、哮喘治疗对照组(C)和哮喘治疗干预组(D)。(TCR-β-/-小鼠分为对照组和治疗干预组:治疗干预组每天1次,连续5天雾化吸入注射用母牛分枝杆菌。对照组予雾化吸入生理盐水10ml。末次取脾,分离γδT细胞悬液鼠尾静脉注射到BALB/C雄性小鼠体内,得到哮喘治疗对照组(C)、哮喘治疗干预组(D)。)模型组和治疗对照组、治疗干预组各组均经卵清蛋白(OVA)致敏和激发制成小鼠支气管哮喘模型。C、D组激发后给予尾静脉注射提取的经雾化吸入生理盐水干预和雾化吸入注射用母牛分枝杆菌干预γδT细胞,每天一次到激发结束。采用肺功能仪检查各组小鼠肺功能后处死提取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)。病理HE染色观察肺组织支气管肺炎症。离心BALF行炎症细胞计数;BALF中IFN-γ和IL-4表达水平用ELISA法检测;肺组织单个核细胞IL-4、IFN-γ占γδT细胞百分比用流式细胞术检测。结果:哮喘组小鼠气道反应性均高于正常组小鼠,哮喘组小鼠气道反应性均高于哮喘治疗对照组和治疗干预组。哮喘治疗干预组小鼠气道炎症病变较哮喘治疗对照组减轻。ELISA结果显示,哮喘组BALF中IL-4水平与正常组相比明显升高,而IFN-γ水平较之明显降低;哮喘治疗对照组与治疗干预组BALF中IL-4水平与哮喘组相比明显降低,而IFN-γ水平教之升高,差异有统计学意义(p0.05)。流式细胞术结果显示:哮喘组小鼠γδT淋巴细胞分泌的IL-4与正常组相比明显增高,IFN-γ明显降低,显示向Th2细胞分化的特征,差异具有统计学意义(p0.05)。哮喘治疗对照组与治疗干预组小鼠肺内的γδT细胞分泌IL-4与哮喘组对比明显减低,IFN-γ明显增高,显示向Th1细胞分化的特征,差异均有统计学意义(p0.05)。结论:雾化吸入母牛分枝杆菌可以减轻OVA致敏引起的Th2优势免疫应答,调节哮喘Th1/Th2免疫失衡。雾化吸入注射用母牛分枝杆菌通过调控γδT细胞影响哮喘小鼠的气道炎症反应,其效应与调节细胞因子分泌有关。第二部分过继免疫γδT细胞对哮喘小鼠气道炎症及对细胞因子的影响目的:通过鼠尾静脉过继免疫γδT细胞干预哮喘小鼠模型,探讨过继免疫γδT细胞对哮喘小鼠气道炎症及对细胞因子IFN-γ、IL-1β、IL-4和IL-18的影响。方法:按随机数字表法将24只雄性Balb/c小鼠分为3组:正常组(A)、哮喘组(B)、哮喘治疗组(C),每组8只。制成小鼠支气管哮喘模型(卵清蛋白(OVA)致敏和激发)。C组激发后给予鼠尾静脉过继免疫γδT细胞治疗,每天一次到激发结束。采用肺功能仪检查各组小鼠肺功能后处死提取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)。病理HE染色观察肺组织支气管肺炎症。离心BALF行炎症细胞计数;检测各组小鼠BALF中IL-1β、IL-18、IL-4和IFN-γ表达水平采用酶联免疫吸附(ELISA)实验;肺组织单个核细胞IL-4、IFN-γ占γδT细胞百分比采用流式细胞术检测。结果:哮喘组小鼠气道反应性均高于正常组小鼠,哮喘组小鼠气道反应性高于哮喘治疗组。哮喘治疗组小鼠气道炎症病变较哮喘组减轻。ELISA结果显示,哮喘组BALF中IFN-γ水平与正常组相比明显降低,而BALF中IL-1β、IL-4和IL-18水平与正常组相比明显升高;哮喘治疗组BALF中IFN-γ水平与哮喘组相比明显升高,而BALF中IL-1β、IL-4和IL-18水平与哮喘组相比明显降低,差异有统计学意义(p0.05)。流式细胞术结果显示:哮喘组小鼠γδT淋巴细胞分泌的IFN-γ与正常组对比明显降低,IL-4明显增高,显示向Th2细胞分化的特征,差异具有统计学意义(p0.05)。哮喘治疗组小鼠肺内的γδT细胞分泌IFN-γ与哮喘组对比明显增高,IL-4明显减低,显示向Th1细胞分化的特征,差异均有统计学意义(p0.05)。结论:鼠尾静脉过继免疫γδT细胞能减轻哮喘小鼠气道炎症,降低IL-1β、IL-4和IL-18水平,升高IFN-γ水平,减轻OVA致敏引起的Th2优势免疫应答。第三部分雾化吸入注射用母牛分枝杆菌对哮喘小鼠NLRP3炎症小体及IL-1β和IL-18的影响目的:观察雾化吸入注射用母牛分枝杆菌对哮喘小鼠外周血中单个核细胞中NLRP3炎症小体表达水平及血清中下游因子白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素18(IL-18)水平变化,探讨雾化吸入注射用母牛分枝杆菌对哮喘小鼠NLRP3炎症小体及血清中IL-1β和IL-18的影响。方法:按随机数字表法将40只雄性Balb/c小鼠分为4组:正常组(A)、哮喘组(B)、哮喘治疗组(C)和哮喘干预组(D)。制成小鼠支气管哮喘模型(卵清蛋白(OVA)致敏和激发)。C组激发后给予雾化吸入注射用母牛分枝杆菌,每天一次。D组激发前给予注射用母牛分枝杆菌雾化吸入,每天一次。采用肺功能仪检查各组小鼠肺功能后处死提取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)。病理HE染色观察肺组织支气管肺炎症。离心BALF行炎症细胞计数;检测各组小鼠外周血单个核细胞中NLRP3用实时荧光定量PCR法。检测各组小鼠血清中IL-1β和IL-18水平用酶联免疫吸附(ELISA)实验。结果:哮喘组小鼠气道反应性均高于正常组小鼠,哮喘组小鼠气道反应性均高于小鼠哮喘治疗组和干预组。哮喘组小鼠外周血单个核细胞中NLRP3、血清中IL-1β和IL-18水平均高于正常组小鼠(P0.01);哮喘组小鼠外周血单个核细胞中NLRP3及血清中IL-1β和IL-18水平均高于小鼠哮喘模型治疗组和干预组(P0.05)。结论:哮喘小鼠外周血NLRP3炎症小体及下游因子IL-1β和IL-18水平升高,NLRP3炎症小体通路可能促进了哮喘的发病过程。雾化吸入注射用母牛分枝杆菌能减轻支气管哮喘小鼠气道炎症,其效应与调节NLRP3炎症小体及血清中IL-1β和IL-18有关。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R562.25
【图文】：

组织病理学,肺组织,杯状细胞,嗜酸性

肺组织组织病理学表现(HE染色×40)

组织病理学,肺组织,淋巴细胞,同治

平滑肌略见肥大增生，气道和血管周围可见稍多淋巴细胞和嗜酸性细胞浸润。干预组镜下见大致同治疗组，淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润之减少。normal group (A) asthma group (B)treatment group (C) prevention group（D）

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