RNA结合蛋白FMRP与细胞间粘附分子ICAM5相互作用调控脆性X综合征树突棘发育的机制研究
发布时间：2020-07-29 07:32
【摘要】：目的脆性X综合征(Fragile X syndrome,FXS)是因脆性X智力低下蛋白(Fragile X mental retardation protein,FMRP,由FMR1基因编码)缺乏引起的一种遗传性智力发育迟滞疾病,是最常见的遗传性智力障碍,也是自闭症谱系障碍(ASD)的主要单基因突变致病因素。FXS特征性神经病理改变是树突棘和突触发育异常,导致其认知功能障碍,但其树突棘发育畸形的机制尚不清楚。单次跨膜蛋白细胞间粘附分子5(Intercellular adhesion molecule 5,ICAM5,也叫端脑素Telencephalin)是免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)超家族成员之一,与神经元和树突棘发育以及树突状丝状伪足的形成和维持有关。本研究旨在利用FXS动物模型,Fmr1基因敲除(Fmr1 KO)小鼠,探讨ICAM5是否参与FXS特征性神经病理改变是树突棘发育异常,并进一步研究RNA结合蛋白FMRP和ICAM5 mRNA的直接相互作用。方法1)FXS动物模型Fmr1 KO(FVB.129P2-Pde6b+Tyrc-ch Fmr1tm1Cgr/J)小鼠,同龄野生型(wild-type,WT)小鼠(FVB.129P2-Pde6b+Tyrc-ch/Ant J)作为在体动物模型,以及取自WT或Fmr1 KO胚胎(E17-E18)前额叶大脑皮层的原代神经元培养作为离体细胞模型;2)高尔基染色检测小鼠出生后树突棘发育改变;3)免疫印迹检测出生天数依赖的ICAM5表达谱;4)RNA免疫沉淀、实时荧光定量PCR和DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定FMRP和ICAM5 mRNA之间的相互作用;5)Dil染色检测神经元树突棘的变化;6)系列行为学实验检测小鼠行为学改变。结果1)ICAM5蛋白在Fmr1 KO小鼠的出生后大脑中上调,但在Fmr1 KO小鼠的出生后大脑中ICAM5 mRNA第30天下降;2)ICAM5蛋白的发育变化平行于Fmr1 KO小鼠树突棘高密度的时间;3)在WT神经元中,干扰FMR1表达后ICAM5蛋白过度表达,ICAM5 mRNA水平不变,幼稚丝状树突棘增多;4)过表达FMR1表达后ICAM5蛋白表达下降,ICAM5 mRNA水平不变,成熟的蘑菇状树突棘增多;5)FMRP的过度表达使ICAM5表达正常化,并进一步改善Fmr1 KO神经元中的树突棘形态;6)FMRP直接与ICAM5 mRNA结合,并通过与ICAM5 mRNA的编码序列相互作用调控ICAM5的表达来影响树突棘成熟。7)ICAM5蛋白的过度表达与Fmr1 KO小鼠的行为异常有关,包括空间记忆和恐惧记忆;减少ICAM5的表达可以改善Fmr1 KO小鼠的行为异常。结论FMRP通过与ICAM5 mRNA的直接相互作用来调节ICAM5的合成,并且Fmr1 KO小鼠中FMRP的缺乏引起ICAM5的过度表达,导致树突棘形态异常和行为的损伤。据我们所知,这是第一个为ICAM5提供功能性连接的研究,这种功能连接在神经元形态和FXS认知损害方面存在缺陷,并且提示FMRP在树突棘形态中起重要作用。
【学位授予单位】：武汉科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R596
【图文】：
图 3.1.1 WT 和 Fmr1 KO 小鼠发育期随年龄依赖的 ICAM5 的表达水平e 3.1.1 Age-dependent changes in ICAM5 expression in postnatal WT and Fmr A and B. Representative western blotting images from three brain regions (prefron, hippocampus and amygdala) at postnatal development stage (postnatal day 1 - P121, and P30). C. Quantification of ICAM5 expression of samples was carried out f
武汉科技大学硕士学位论文否也影响 Fmr1 KO 小鼠中的 ICAM5 mRNA 表达。用 qRT-PCR 评估前额叶，海马和杏仁核中 ICAM5 mRNA 的表达（图 3.1.2, n = 7）。前三周内 WO 动物的 ICAM5 mRNA 水平没有差异。然而，在出生后第 30 天，与野生相对增加相比，Fmr1 KO 小鼠中 ICAM5 mRNA 水平降低（图 3.1.2）。因与 ICAM5 蛋白水平的增加相反，在出生后第 30 天，Fmr1 KO 小鼠的所有脑区域中检测到 ICAM5 mRNA 水平的降低。
23图 3.2.1 Fmr1 KO 皮质中大量未成熟的丝状伪足树突棘随年龄依赖的改变re 3.2.1 Age-dependent alterations of an abundance of filopodia-like spines in Fmr1 KO
本文编号：2773633
【学位授予单位】：武汉科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R596
【图文】：
图 3.1.1 WT 和 Fmr1 KO 小鼠发育期随年龄依赖的 ICAM5 的表达水平e 3.1.1 Age-dependent changes in ICAM5 expression in postnatal WT and Fmr A and B. Representative western blotting images from three brain regions (prefron, hippocampus and amygdala) at postnatal development stage (postnatal day 1 - P121, and P30). C. Quantification of ICAM5 expression of samples was carried out f
武汉科技大学硕士学位论文否也影响 Fmr1 KO 小鼠中的 ICAM5 mRNA 表达。用 qRT-PCR 评估前额叶，海马和杏仁核中 ICAM5 mRNA 的表达（图 3.1.2, n = 7）。前三周内 WO 动物的 ICAM5 mRNA 水平没有差异。然而，在出生后第 30 天，与野生相对增加相比，Fmr1 KO 小鼠中 ICAM5 mRNA 水平降低（图 3.1.2）。因与 ICAM5 蛋白水平的增加相反，在出生后第 30 天，Fmr1 KO 小鼠的所有脑区域中检测到 ICAM5 mRNA 水平的降低。
23图 3.2.1 Fmr1 KO 皮质中大量未成熟的丝状伪足树突棘随年龄依赖的改变re 3.2.1 Age-dependent alterations of an abundance of filopodia-like spines in Fmr1 KO
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 张妍;唐民科;张均田;;树突棘与学习记忆[J];国际神经病学神经外科学杂志;2006年04期
本文编号：2773633
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