miR-19b调控胰腺祖细胞增殖及其机制研究

发布时间：2020-08-06 21:33

【摘要】：糖尿病是一种慢性内分泌代谢疾病,其病因是胰岛β细胞受损伤或者胰岛素拮抗引发的高血糖症,它目前已经成为世界性的致死疾病,严重危害着人类的健康。通过胚胎干细胞或胰腺干细胞等诱导分化成为胰岛β细胞是糖尿病治疗的新兴方案,它优于胰岛素注射、胰岛移植等传统疗法,现已取得快速发展。但是由于干细胞增殖和分化都受到复杂的调控,仍需要对胰腺祖细胞进行更进一步的深入研究,才能早日应用于临床,为糖尿病提供良好的治疗方法胰腺祖细胞的增殖受到多种因子的调控,其中包括microRNA(miRNA)。miRNA是高度保守的非编码微小RNA,通过结合到其靶基因mRNA的3UTR,在转录后水平调控基因的表达,参与调节生命体的各个过程,包括细胞分化、细胞增殖、器官发育和肿瘤的发生等。miR-19b是miR-17-92基因簇cluster的重要成员之一,在肿瘤和干细胞中起着重要的调控作用。本实验室发现miR-19b可以通过靶向NeuroDl抑制小鼠胰腺β细胞中insulin的表达,这说明miR-19b参与调控胰腺的发育过程;而另一部分实验结果显示miR-19b对胰腺祖细胞的增殖可能会有影响。本研究在胰腺祖细胞中过表达或抑制miR-19b,发现过表达miR-19b可以通过靶向抑制其靶基因PTEN促进PI3K/AKT信号通路,从而显著促进胰腺祖细胞增殖,miR-19b不影响PTEN的mRNA,但明显下调其蛋白水平;在胰腺祖细胞中抑制miR-19b虽然可以促进PTEN的表达,但是对细胞增殖并没有明显的影响。此外,miR-19b还促进了 ERK信号通路的激活,但并不影响STAT3信号通路的活性。miR-19b也促进了 Wnt信号通路关键蛋白β-catenin的mRNA和蛋白水平;该miRNA还上调了 Hippo信号通路效应因子YAP的mRNA和蛋白水平,YAP的主要下游靶基因CCNE1的水平也显著升高,这说明miR-19b也激活了 Wnt和Hippo这两个通路。本实验室此前发现miR-18a可以显著抑制胰腺祖细胞的增殖。在本研究发现miR-19b与miR-18a共同过表达可以逆转并回复miR-18a对胰腺祖细胞增殖的抑制作用,且miR-18a靶向抑制的四个基因水平也发生了逆转和上调,这说明在胰腺祖细胞中miR-19b与miR-18a有着相互拮抗的作用,但是其中的分子机制尚不明确,有待进一步研究探讨。
【学位授予单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R587.1
【图文】：

差异表达,成体,祖细胞,腺泡细胞

５００吣渗透剂，在脱色摇床上清洗细，在脱色摇床上避光孵育５邋ｍｉｎ。逡逑Ｓ清洗细胞３次，每次５邋ｍｉｎ。逡逑０邋ｐＬ邋ＰＢＳ／甘油混合液（１：１），即可观察，用荧光显微镜观察并采集细胞图片，用Ｉ３个复孔。逡逑细胞中的差异表达逡逑成体胰腺细胞中的表达模式，我们用ｑ和（３细胞系ＭＩＮ６中ｍｉＲ－１９ｂ的表达泡细胞中ｍｉＲ－１９ｂ的表达水平降低，的下降（图２－１）。这种差异表达说明ｍｉ胞的增殖或分化过程。逡逑

祖细胞,过表达,胰腺,转染

胰腺祖细胞的增殖情况。如图所示，转染后４８邋ｈ用ｑＲＴ－ＰＣＲ确认ｍｉＲ－１９ｂ的过表达和逡逑被抑制（图２－１邋Ａ），再通过光镜观察到ｍｉＲ－１９ｂ明显的促增殖作用（图２－１邋Ｂ）。随后我逡逑们用ＣＣＫ８邋（图２－１Ｃ）和Ｅｄｕ邋（图２－１Ｄ）检测过表达或抑制ｍｉＲ－１９ｂ后胰腺祖细胞的逡逑增殖情况，发现过表达ｍｉＲ－１９ｂ可以显著促进胰腺祖细胞增殖，但是抑制ｍｉＲ－１９ｂ的表逡逑达却对增殖没有影响。逡逑Ａ逡逑２00］邋＾逡逑｜邋逦逡逑Ｓ邋１５０＇逦ｐｃｊｗｗ逡逑Ｉ邋－逦Ｉ逡逑５逦ｔｆｗＨ逦＊★＊逡逑ａ：逦ｓｏ邋N逦逦逡逑0邋ｉ0ｉｍWW逡逑uk邋°－５ｌｌ邋１邋ｉ邋■逡逑？邋Ｖ、Ｖ，逡逑Ｂ逡逑ＮＣ逦ｍｉＲ－１９ｂ逡逑ｒｎｍｉｍ逡逑ＮＣＩＮ逦ｍｉＲ－１９ｂＩＮ逡逑－１３－逡逑

双荧光,报告系统,荧光素酶

ｍｉＲ－１９ｂ的靶基因。逡逑３．４．２双荧光素酶报告载体检测ｍｉＲ－１９ｂ对于ＰＴＥＮ的靶向调控作用逡逑根据软件的预测结果，ＰＴＥＮ的３＇ＵＴＲ上有两个ｍｉＲ－１９ｂ的靶位点（图３－１）。为了逡逑确定ｍｉＲ－１９ｂ对于ＰＴＥＮ的直接靶向作用，我们构建了含有着两个靶位点的荧光素酶报逡逑告载体以及海肾荧光素酶报告载体，将这两个载体与ｍｉＲ－１９ｂ共同转染至３Ｔ３细胞中，逡逑４８ｈ后再用仪器进行荧光活性的测定

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