利拉鲁肽对糖尿病大鼠牙周炎抗炎和成骨作用的影响

发布时间：2020-08-08 06:40

【摘要】：背景牙周炎是一种感染性疾病,表现为牙根周围的牙槽骨吸收。糖尿病可通过抑制骨的形成来加重牙周炎引起的牙槽骨的吸收。研究表明,胰高血糖素样肽1受体激动剂(Glucagon-like peptide-1 receptor agonists,GLP-1RAs)在糖尿病啮齿类动物和患者的骨骼代谢中具有潜在的有益作用。新型抗糖尿病药物利拉鲁肽(Liraglutide,LIRA)作为一种胰高血糖素样肽1受体激动剂,具有抗炎和骨保护等作用。利拉鲁肽的应用能促进骨的合成代谢作用。本研究评估了治疗糖尿病的药物利拉鲁肽对糖尿病牙周炎(Diabetes periodontitis,DP)大鼠牙槽骨吸收和炎症反应的影响。目的探讨LIRA对糖尿病大鼠牙周炎的潜在治疗作用。通过建立实验性糖尿病牙周炎大鼠模型,分析了利拉鲁肽对糖尿病大鼠牙周炎的抗炎作用及成骨分化的影响,为临床应用LIRA治疗糖尿病牙周炎提供理论依据。方法46只雄性的Wistar大鼠随机分为4组:Control组(无结扎、生理盐水安慰剂和STZ注射组)、LIRA组(无结扎和STZ注射的利拉鲁肽给药组)、DP+NaCl组(结扎和STZ注射的生理盐水安慰剂组)和DP+LIRA组(结扎和STZ注射的利扎鲁肽给药组)。经STZ注射和牙周结扎成功建立糖尿病牙周炎大鼠后,利拉鲁肽按每只大鼠300μg/kg/d,持续28天。处死大鼠取血样并提取其上颌骨进行检测。通过ELISA试剂盒检测血清中的炎性细胞因子(IL-6、TNF-α和IL-1β)和降钙素(Calcitonin,CT)的水平。HE染色法观察各组牙周组织的形态变化;通过组织形态学和微型计算机断层扫描(Micro-CT)观察牙槽骨的吸收情况及其超微结构改变;通过免疫组织化学检测牙槽骨中RANKL和OPG的表达。通过qRT-PCR检测分析牙龈上皮中Runx2和ALP mRNA的表达水平。结果1.糖尿病牙周炎模型的建立:与对照组相比,实验组大鼠具有多食、多饮、多尿等症状并出现空腹血糖升高,糖耐量异常,糖尿病模型建立;牙周临床指标升高且有统计学意义(p0.05),结合上皮根方增殖,附着丧失,牙槽骨吸收,牙齿松动,则成功建立糖尿病牙周炎大鼠。2.ELISA检测结果显示与DP+NaCl组相比,DP+LIRA组大鼠血清中炎性因子IL-6、TNF-α和IL-1β的分泌水平明显降低(p0.05),降钙素的分泌明显升高(p0.05)。3.组织形态学和Micro-CT结果显示与DP+NaCl组相比,DP+LIRA组大鼠牙槽骨的吸收明显降低,牙槽骨的微观结构明显改善(p0.05)。4.HE染色和免疫组织化学结果显示DP+LIRA组较DP+NaCl组大鼠的牙周组织炎症反应严重,且NF-κB配体(RANKL)/骨保护素(OPG)比率明显降低(p0.05)。5.qRT-PCR结果显示LIRA组Runx2和ALP mRNA的表达高于Control组(p0.05),而DP+LIRA组的Runx2和ALP mRNA的表达高于DP+NaCl组(p0.05)。结论1.成功建立糖尿病牙周炎大鼠模型;2.LIRA抑制糖尿病牙周炎大鼠血清IL-6、TNF-α和IL-1β的分泌,促进降钙素的分泌;3.LIRA全身给药可有效地减少STZ诱导的糖尿病大鼠中牙槽骨的吸收,改善糖尿病大鼠牙周炎的炎症反应,并且在一定程度上促进牙槽骨的成骨分化。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R587.2;R781.4
【图文】：

牙周炎,大鼠模型,糖尿病,二甲苯

烤2 h后取出。水：二甲苯5 min→无水乙醇2 min→95％乙醇1 min→8醇1 min→双蒸水洗1 min。（各两次，吸干水）木素染色后，流水冲洗。（吸干水）醇分化：30 s。15 min。（吸干水）色2 min。透明，封片：95％乙醇1 min×2→无水乙醇1 min×2→二→二甲苯1 min×2→封片，镜下观察。分析0 用于处理与分析实验数据，p<0.05 为差异有统计学意AB

口服葡萄糖耐量试验,糖尿病大鼠,曲线下面积,建模

2.5.2.1 糖尿病大鼠一般体症状态Control 组和 LIRA 组大鼠毛发正常，活动良好，有活力；DP+LIRA 组和DP+NaCl 组建模后，大鼠毛发脱落无光泽，活动少，缺乏活力，反应慢。与 Control组和 LIRA 组相比，DP+LIRA 组和 DP+NaCl 组大鼠的饮水量及摄食量显著增加，体重逐渐减轻，多尿，垫料更易潮湿，有刺鼻的气味，每天需换 2 次垫料；其空腹血糖逐渐升高，最终趋于稳定。DP+LIRA 组和 DP+NaCl 组糖尿病大鼠建模成功后，出现了“三多一少”的典型的临床特征，即多饮、多食、多尿、体重减少且空腹血糖"g11.3 mmol/L，糖尿病大鼠模型造模成功，本实验 30 只大鼠成功建模。2.5.2.1 OGTT 的结果OGTT的结果显示：与Control组相比，LIRA组各时间点血糖值无显著差异（p>0.05），曲线下面积（Area under the curve，AUC）亦无显著差异（p>0.05）；与Control组、LIRA组相比，DP+NaCl组、DP+LIRA组各时间点的血糖水平均显著升高（p<0.01），曲线下面积（AUC）亦明显高于两组（p<0.01）。这表明实验组大鼠有高血糖和异常的葡萄糖耐量。

牙周组织,大鼠,比例尺,图像

图 2-3 四组大鼠牙周临床指标。(A)四组大鼠牙龈出血指数；（B）四组大鼠牙周袋深度；（C）四组大鼠牙齿松动度。** p<0.01。Figure 2-3 Four groups of rat periodontal clinical indicators. (A) Four groups of rats gingivalbleeding index; (B) Four groups of rats periodontal pocket depth; (C) Four groups of rats toothlooseness. ** p < 0.01.2.5.2.2 HE 染色观察牙周组织形态HE 染色结果显示：Control 组和 LIRA 组大鼠牙龈上皮完整，无附着丧失，结缔组织无异常改变。DP+LIRA 组和 DP+NaCl 组出现沟内上皮内有大量炎细胞浸润；胶原纤维水肿变性，部分降解，结合上皮根向增殖和牙槽骨吸收。

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