糖尿病大鼠单侧迷路切除术后行为学及GLUT3、GLUT4、胰岛素受体、APP在前庭核团、海马和小脑旁绒球分布变化的观察比

发布时间：2020-08-22 15:26

【摘要】：目的1.通过对单侧迷路切除术后糖尿病大鼠前庭代偿中行为学相关指标评分以及糖尿病大鼠前庭肌诱发电位的结果分析,以期探索糖尿病病程对于前庭神经反射通路和前庭代偿建立的影响。2.通过检测四组(糖尿病组、对照组、糖尿病手术组、对照手术组)前庭核团、海马、小脑旁绒球葡萄糖转运蛋白3(Glucose transporter 3,GLUT3)和葡萄糖转运蛋白4(Glucose transporter 4,GLUT4)的表达变化;以期从细胞能量代谢的角度探索前庭代偿的机制及糖尿病的影响。3.通过原位杂交方法检测前庭核团区、小脑旁绒球区有无胰岛素受体-P mRNA和APP mRNA的表达。免疫组化的方法检测上述相关区域有无β淀粉样蛋白的表达,以期探索糖尿病促脑组织老化作用对于前庭中枢部分解剖区域可能的影响。实验对象及方法用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)造雄性SD大鼠糖尿病模型;手术破坏并氯仿注入内耳造单侧迷路切除模型;分别针对不同糖尿病病程大鼠行颈肌前庭诱发肌源性电位(cervical Vestibular evoked potential,cVEMP)检测,术后在不同时间点给予失衡症状评分。取糖尿病组12周随机分两组:假手术组和单侧迷路切除组。正常大鼠随机分两组对照组和迷路切除组。于术后24小时,取脑组织,依据《大鼠脑立体定位图谱(3版)》定位切片,选取前庭核团区域、海马、小脑旁绒球采用免疫组化和原位杂交的方法检测葡萄糖转运蛋白3、葡萄糖转运蛋白4、免疫组化方法检测上述区域β淀粉样蛋白;通过原位杂交方法检测上述区域胰岛素受体-PmRNA、APPmRNA。另取饲养18个月的雄性SD大鼠为老年组,同上定位并取相应区域检测。结果1.cVEMP检测示:随着成模时间延长,糖尿病组从第8周开始,阈值、P1潜伏期、N1潜伏期与对照组比较具有统计学差异(P0.05),表现为阈值升高和潜伏期延长。对照组与糖尿病不同时期组的P1-N1波间振幅不具有统计学差异(P0.05)。2.失衡症状评分示:糖尿病12周组失衡症状评分在术后12小时及以后的各时间点与对照组比较均具有统计学差异(P0.05)。3.GLUT3、GLUT4免疫组化在前庭核团、海马、小脑旁绒球糖尿病假手术组、手术组和正常对照组、对照手术组组间比较。GLUT3在前庭核团区,糖尿病组、糖尿病手术组分别与对照组、正常手术组比较均有统计学差异(P0.05);手术组(糖尿病、正常组)术后左右两侧比较无明显统计学差异(P0.05);糖尿病手术组两侧与正常大鼠术后两侧分别比较有统计学差异(P0.05);糖尿病手术组与老年大鼠组比较无明显统计学差异(P0.05);正常手术组与老年大鼠组比较有显著统计学差异(p0.01)。比较海马区GLUT3,糖尿病两组之间无明显统计学差异(P0.05);对照组与正常手术组有明显统计学差异(P0.05)。糖尿病组与对照组和正常手术组比较均有明显差异(P0.05);糖尿病手术组与对照组和正常手术组比较均有明显差异(P0.05)比较小脑旁绒球GLUT3,糖尿病组与糖尿病手术组比较无显著差异(P0.05);对照组与对照手术组比较有显著差异(P0.05);糖尿病组、糖尿病手术组分别与对照组和对照手术组比较均有显著差异(P0.05)。GLUT4前庭核团区,上述四组比较有显著差异(P0.05),根据秩均值大小排列,正常手术组糖尿病组糖尿病手术组对照组。GLUT4海马区比较,四组比较有显著差异(P0.05);根据秩均值大小排列正常手术组对照组糖尿病手术组糖尿病组。小脑旁绒球区比较,四组比较无显著差异(P0.05)。GLUT3前庭核团区原位杂交上述四组比较有明显统计学差异(P0.05);GLUT3海马区原位杂交四组比较无明显统计学差异(P0.05);GLUT3绒球区原位杂交四组比较有明显统计学差异(P0.05)。GLUT4前庭核团原位杂交四组比较无明显统计学差异(P0.05);GLUT4绒球区原位杂交四组比较无明显统计学差异(P0.05);GLUT4海马区原位杂交四组比较无明显统计学差异(P0.05)。4.淀粉样蛋白检测糖尿病组未发现阳性表现。APPmRNA原位杂交前庭核团区:四组有显著差异P0.05。根据秩均值大小排列糖尿病组(57.25)糖尿病手术组(43.42)对照手术组(44.35)对照组(32.48)。APP旁绒球区:四组比较有显著差异(P0.05)根据秩均值大小排列糖尿病组27.88糖尿病手术组27.20对照组10.25对照手术组8.90。APP海马区:糖尿病组与对照组比较两个独立样本T检验两组有显著差异(P0.05)。APP前庭核团区,糖尿病组与对照组、老年组比较:三组间有明显统计学差异P0.05,根据秩均值大小排列糖尿病组36.32老年组29.45青年组22.74。线性回归检测:前庭肌诱发电位P1潜伏期与APP具有相关性,与GLUT3、GLUT4无明显相关;N1潜伏期与APP、GLUT3、GLUT4无明显相关性,阈值与APP,GLUT3、GLUT4无相关性。5.胰岛素受体-PmRNA原位杂交糖尿病组和老年组在前庭核团区域比较无明显差异(P0.05);糖尿病组和对照组比较在前庭核团区域有明显差异(P0.05);旁绒球糖尿病组和对照组无明显差异(P0.05)。结论1.糖尿病病程对cVEMP检测有影响,体现在刺激阈值升高、P1,N1波潜伏期的延长,而振幅无明显差异。2.随着糖尿病病程延长而静态代偿时间延长。3.单侧迷路破坏后,前庭核团、海马、小脑旁绒球区葡萄糖转运蛋白有明显变化,提示前庭代偿期间该区域功能细胞基础代谢可能发生改变。糖尿病对于上述区域的葡萄糖转运蛋白3、4含量具有影响,可能降低上述区域神经元的基础代谢,从而对维持正常的前庭功能和代偿建立起到负面作用。4.前庭核团和旁绒球存在胰岛素受体mRNA,上述区域可能受周围胰岛素变化的影响,并由此发生相应功能上的改变,糖尿病导致胰岛素含量减少有可能会影响上述区域的功能。糖尿病致脑老化作用可能是APP增多的原因,APP增多可能会影响到cVEMP的检测结果,并可能对中枢前庭通路造成影响。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R587.1;R764
【图文】：

阈值,图形,糖尿病,对照组

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