曲克芦丁通过抑制破骨、促进成骨而减少卵巢切除引起的骨量丢失

发布时间：2020-08-27 22:06

【摘要】：目的:探讨曲克芦丁对卵巢切除诱导的骨质疏松小鼠骨量的影响及其对破骨细胞和成骨细胞的作用机制。方法:在体内动物实验中,给经过假手术或卵巢切除术的雌性小鼠腹腔内注射生理盐水、50mg/kg曲克芦丁或150mg/kg曲克芦丁 6周,然后处死并用于微型计算机断层摄影术(micro-CT)分析、组织学分析和生物力学测试。在体外细胞实验中,用不同浓度的曲克芦丁处理自RAW264.7细胞分化而来的破骨细胞和自MC3T3-E1细胞分化而来的成骨细胞,以探究曲克芦丁对破骨细胞的形成及其骨吸收功能和成骨细胞的分化及其钙化能力的影响。结果:在体内实验中,曲克芦丁通过减少破骨细胞生成和促进成骨生成来防止去卵巢小鼠中的皮质骨和小梁骨的丢失。在体外实验中,曲克芦丁抑制分化自RAW264.7的破骨细胞的形成和骨吸收功能以及活化T细胞核因子1(NFATcl)和组织蛋白酶K(CTSK)的表达。同时,曲克芦丁通过增强Runt相关的转录因子2(Runx2)、Osterix和I型胶原蛋白αl亚基(COL1A1)的表达来促进MC3T3-E1的成骨和矿化。结论:曲克芦丁可以通过调节破骨细胞和成骨细胞的生成及活性从而预防小鼠卵巢切除所诱导的骨质疏松症,有望用于治疗绝经后骨质疏松症。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R580
【图文】：

我们首先研究了邋ＴＲＸ对ＯＶＸ小鼠引起的骨质疏松症的影响。既往的研究逡逑表明，雌激素缺乏性小鼠骨质疏松模型的建立总是伴随着小鼠体重的增加和子宫逡逑重量的减少［２５］，而这种现象也出现在了我们的实小鼠当中（图１Ａ），意味着逡逑ＯＶＸ手术的有效实施。在小鼠饲养的６周内，Ｓｈａｍ组、Ｖｅｈｉｃｌｅ组、ＬＤ组和ＨＤ逡逑组在相同条件下腹腔注射不同浓度的ＴＲＸ并相互对照，其左侧胫骨均使用逡逑Ｍｉｃｒｏ－ＣＴ进行评估。在松质骨骨小梁方面，与Ｓｈａｍ组相比，ＯＶＸ组的三维重逡逑建图像显现出相对较细且少的骨小梁（图１Ｂ）。然而，与Ｖｅｈｉｃｌｅ组相比，ＴＲＸ逡逑治疗组（ＬＤ和ＨＤ组）的ＢＷＴＶ，Ｔｂ．Ｎ和Ｔｂ．Ｔｈ以剂量依赖性显著增加（图逡逑１Ｃ）；同时这两组中ＴＲＸ的施用降低了骨小梁的Ｔｂ．Ｓｐ邋（图１Ｃ）。组织学分析进逡逑一步证实了邋ＴＲＸ对骨小梁骨质流失的保护作用（图１Ｄ）。在Ｖｅｈｉｃｌｅ组中使用Ｈ逡逑＆Ｅ染色，与Ｓｈａｍ组相比，股骨小梁骨量显著降低；然而，在ＴＲＸ治疗组中，逡逑股骨小梁的骨量均多于Ｖｅｈｉｃｌｅ组。通过ＩｍａｇｅＪ邋（ＮＩＨ，邋Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，邋ＵＳＡ）逡逑获得的ＢＶ／ＴＶ、Ｔｂ．Ｎ、Ｔｂ．Ｔｈ和Ｔｂ

逦正文实验结果逡逑ＴＲＸ对皮质骨厚度的保护作用（图２Ｃ，邋Ｄ）。股骨三点弯曲试验进一步证实，通逡逑过腹腔内注射ＴＲＸ，有效抑制了由ＯＶＸ导致的皮质骨薄弱，表现为在载荷－位逡逑移曲线中，ＬＤ组和ＨＤ组的最大弯曲力和导致骨折的最大功均大于Ｖｅｈｉｃｌｅ组，逡逑但略低于Ｓｈａｍ组（图２Ｅ）。逡逑总的来说，以上这些发现表明ＴＲＸ可以有效防止由卵巢切除引起的骨小梁逡逑和皮质骨中的骨量丢失。逡逑Ａ逦Ｃ逡逑Ｓｈａｍ逡逑ＳＳ邋Ｔｉｌｌ逡逑W■邋：１］逡逑Ｂ逦Ｄ逡逑ＷＨｆｔ邋ｌ？邋ｔｍ逦ＳＨＷＷ邋Ｗｈ邋ＩＬ？邋Ｗ＆逡逑Ｅｆ逦５逡逑ｉｌｉｉｉ邋ｔｌｉｌｉ逡逑图２：邋（Ａ）胫骨皮质骨的ｍｉｃｒｏ－ＣＴ三维重建图像。比例尺，４００（ｘｍ。（Ｂ）根逡逑据胫骨ｍｉｃｒｏ－ＣＴ扫描结果计算出的皮质厚度（Ｃｔ．Ｔｈ）。（Ｃ）股骨皮质骨的苏逡逑木精和伊红（Ｈ＆Ｅ）染色。比例尺，４００ｐｍ。（Ｄ）邋Ｈ＆Ｅ染色中股骨节段的皮逡逑质厚度（Ｃｔ．Ｔｈ）。（Ｅ）从股骨的三点弯曲测试获得的最大力（ＭａｘｉｍｕｍＦｏｒｃｅ）逡逑和骨折时的做功（Ｅｎｅｒｇｙ邋ｔｏ邋ｆａｉｌｕｒｅ）。以上所有结果均以平均值±标准偏差（ｎ逡逑＝６）表示。＊代表与邋Ｖｅｈｉｃｌｅ邋组相比，＊Ｐ＜０．０５邋和＊＊Ｐ＜０．０１邋（ｔ邋检验）。Ｖｅｈｉｃｌｅ：逡逑ＯＶＸ＋生理盐水；ＬＤ：邋ＯＶＸ＋低剂量邋ＴＲＸ邋（５０ｍｇ／ｋｇ）；邋ＨＤ：邋ＯＶＸ＋高剂量逡逑ＴＲＸ邋（１５０ｍｇ／ｋｇ）。逡逑１２逡逑

图３：邋（Ａ，邋Ｂ）甲苯胺蓝和抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）染色的股骨图像。逡逑比例尺，ｌ0（Ｈｉｍ。邋（Ｃ，邋Ｄ）成骨细胞与骨的表面积比值（ＯｂＳ／ＢＳ）和单位逡逑骨周长的成骨细胞数（ＮＯｂ／ＢＰｍ），破骨细胞与骨的表面积比值（ＯｃＳ／ＢＳ）逡逑和单位骨周长的破骨细胞数（ＮＯｃ／ＢＰｍ）。（Ｅ－Ｈ）股骨的免疫组织化学染色。逡逑比例尺，ｌＯＯ＾ｏｎ。计算碱性磷酸酶（ＡＬＰ）阳性细胞数和活化Ｔ细胞核因子１逡逑（ＮＦＡＴｃｌ）阳性细胞数。以上所有结果均以平均值±标准偏差（ｎ＝邋６）表示。逡逑＊代表与邋Ｖｅｈｉｃｌｅ邋组相比，＊Ｐ邋＜０．０５邋和＊＊Ｐ邋＜０．０１邋（ｔ邋检验）。Ｖｅｈｉｃｌｅ：邋ＯＶＸ＋生逡逑理盐水；ＬＤ：邋ＯＶＸ＋低剂量邋ＴＲＸ（５０ｍｇ／ｋｇ）；邋ＨＤ：邋ＯＶＸ＋高剂量邋ＴＲＸ（１５０ｍｇ逡逑／ｋｇ）0逡逑３．２邋ＴＲＸ于体内可以调节由成骨细胞和破骨细胞介导的骨代谢。逡逑１

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1 记者 叶明e

本文编号：2806663