高尿酸血症对小鼠牙槽骨骨微结构及骨代谢的影响

发布时间：2020-08-31 20:55

　　【目的】:通过比较高尿酸血症(Hyperuricemia,HUA)小鼠与正常小鼠的牙槽骨的骨微结构、骨量、破骨及成骨能力初步探究HUA对小鼠牙槽骨骨微结构、骨量、骨代谢及增龄性变化趋势的影响。【方法】:1、实验动物分组:8周龄及32周龄的尿酸氧化酶基因敲除(urate oxidase gene knocked out,Uox-KO)小鼠各4只为实验组,8周龄及32周龄的野生型(Wild type,WT)小鼠各4只作为对照组。实验前检测所有小鼠的尿酸,血糖及体重分别为:Uox-KO组小鼠的血清尿酸浓度大于WT组小鼠;同周龄两组小鼠的体重、血糖间无差异。2、解剖分离每只小鼠的双侧上下颌骨。3、牙槽骨骨微结构的检测分析(1)Micro-CT扫描后,通过影像图及三维重建后矢状向切面图的观察,分析第一磨牙牙根之间牙槽骨的骨质破坏的特点。(2)牙槽骨的骨微结构的检测:观察分析牙槽骨的骨微结构,检测BV/TV值、Tb.N值、Tb.Th值、Tb.Sp值。4、牙槽骨骨代谢的检测:上颌骨行HE染色,OCN、OPN免疫组化染色检测成骨活性,RANKL蛋白的染色检测破骨活性,并观察、比较分析牙槽骨的骨代谢情况。5、牙颈部牙槽骨吸收高度的测量:下颌骨经亚甲蓝染色后分别测量比较下颌两侧第一磨牙近远中的牙槽嵴顶至釉牙骨质界的距离,两侧测量结果取平均值作为每只小鼠的牙颈部牙槽骨吸收的最终高度,以此高度间接反应牙槽骨的骨量。6、用GraphPad Prism7.0统计软件比较分析Uox-KO与WT小鼠间以及每组不同周龄小鼠的牙槽骨骨小梁微结构、牙槽骨骨量、牙槽骨成骨和破骨活性的差异。【结果】:1、牙槽骨骨微结构的检测分析:(1)Micro-CT扫描后的影像图及重建后矢状向切面图均未见8周龄Uox-KO与WT小鼠第一磨牙牙根之间牙槽骨骨质破坏的明显差别;32周龄Uox-KO组小鼠扫描后的影像图及重建后矢状向切面图均发现牙槽骨骨质破坏面积比WT组小鼠小。(2)牙槽骨的骨微结构检测结果:与8周龄小鼠相比,Uox-KO组和WT组32周龄小鼠的BV/TV、Tb.N较小(P0.05),Tb.Sp较大(P0.05),Uox-KO组32周龄小鼠Tb.Th较大(P0.05)。32周龄Uox-KO组小鼠的BV/TV和Tb.N均大于WT组小鼠(P0.05),Tb.Sp小于WT组小鼠(P0.05)。2、牙槽骨骨代谢检测结果:HE染色比较发现,Uox-KO组和WT组的32周龄小鼠牙槽骨均发生了明显的缺损,骨陷窝面积大而多。32周龄小鼠的HE染色可见两组小鼠均存在牙槽骨被吸收后的骨陷窝,免疫组化染色结果未见明显差异。8周龄小鼠的免疫组化染色结果为Uox-KO组小鼠的OPN、OCN染色比WT组颜色深,仅Uox-KO组小鼠OCN染色图片的平均光密度值大于WT组(P0.05);RANKL染色未见明显差别。3、牙颈部牙槽骨骨吸收高度测量结果:Uox-KO组32周龄小鼠下颌第一磨牙近中牙颈部牙槽骨吸收高度大于8周龄小鼠(P0.05);32周龄Uox-KO组小鼠的下颌第一磨牙远中的牙槽骨吸收高度大于WT组小鼠(P0.05)。8周龄Uox-KO组与WT组小鼠的牙槽骨吸收高度未见明显差异。【结论】:1、HUA影响8周龄至32周龄生长过程中的小鼠牙槽骨骨微结构和骨代谢的变化,在此生长过程中,HUA小鼠的骨质疏松趋势没有正常小鼠明显,并且32周龄HUA小鼠较同周龄正常小鼠的骨小梁结构破坏丢失得少,说明HUA可能会降低小鼠骨质疏松的趋势,保护牙槽骨组织。2、小鼠的牙槽骨存在增龄性变化趋势,随年龄增长,小鼠牙槽骨骨微结构破坏,骨陷窝增多,存在骨质疏松趋势。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R589.7
【部分图文】：

小鼠,鉴定结果,青岛大学,附属医院

自青岛大学附属医院山东省于青岛大学附属医院 SPF 实灯光、饮水及饮食。如下分组：尿酸氧化酶基因敲除（ura青少年和成年 Uox-KO 小周出生的 8 周龄及 32 周龄和成年实验组小鼠的对照小测，小鼠检测的基本信息如ox-KO 组和 WT 组小鼠基第 1 泳道所示。WT 组小鼠只具有 202bp 和 250bp 两个条 2.1）。

尿酸,周龄,体重,血糖浓度

且不同周龄小鼠间以及 Uox-KO 小鼠与 WT 小鼠间无显著性差异，可排除糖病造成的牙槽骨吸收（表 2.1、图 2.2）。表 2.1 Uox-KO 与 WT 组小鼠间的尿酸、体重及血糖浓度的比较（ ±s，n=4）Uox-KO 组 WT 组 P8 周龄尿酸（μmol/L） 454.50 ± 64.17 120.50 ± 13.39 0.003**体重（g） 17.25 ± 0.49 20.00 ± 1.03 0.053血糖（nmol/L） 7.86 ± 0.94 8.53 ± 0.93 0.62932 周龄尿酸（μmol/L） 470.30 ± 70.87 193.50 ± 20.34 0.004**体重（g） 28.55 ± 1.05 27.65 ± 0.82 0.525血糖（nmol/L） 7.93 ± 0.58 9.056 ± 0.78 0.292** P<0.01

显微镜下,上颌骨,第一磨牙,骨体

图 2.3：动物解剖显微镜下的上下颌骨(左为上颌骨，右为下颌骨)2.2 骨微结构的检测分析将小鼠上颌骨行 Micro-CT 扫描，分析检测小鼠牙槽骨的骨微结构及三维图像中槽骨特点；固定后的上颌骨通过 Micro-CT（uCT-50 , SCANCO Medical AG,abrikweg2, CH-8306 Bruettisellen, 瑞士）进行骨组织断层扫描及重建。扫描条件为：压 70KV，扫描电流为 200uA，分辨率为 8um，每个样本扫描时间大概为 1 小时。兴趣区域（the region of interest，ROI）的选择：选择上颌骨第一磨牙牙根之间的槽骨作为骨微结构定量分析的区域，在此区域选择近似位置的 400*400*400 微米积的组织行三维立体分析。（1）三维重建图像的比较：取经第一磨牙近远中边缘嵴中点连线并垂直于咬合的矢状向切面图进行观察比较第一磨牙牙根之间牙槽骨骨质缺损的特点。（2）骨微结构的分析参数：使用 Micro-CT 自带的分析软件分别对两个周龄的组小鼠 ROI 区域进行骨定量分析，分析指标为；相对骨体积或骨体积分数（BV/TV）、

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