DPT和HtrA1在脂肪组织重构过程的表达变化研究

发布时间：2020-10-09 16:13

　　目的:皮肤桥蛋白(Dermatopontin,DPT)作为一种非胶原蛋白,参与调节其他细胞外基质成分之间的相互作用。HtrA1(High temperature requirement A1,HtrA1)丝氨酸蛋白酶在应激条件下被诱导合成和分泌,降解组织中生理或病理过程中的异常细胞外基质成分。我们发现DPT和HtrA1在脂肪组织中的基础表达较高,但目前尚不明确它们在脂肪中的作用。本研究旨在观察DPT和HtrA1基因在不同代谢状态的脂肪组织重构过程中的表达变化。方法:利用公共数据库观察DPT和HtrA1的组织表达谱,并运用实时定量PCR和蛋白质印迹法验证小鼠中DPT和HtrA1的组织表达谱;检测DPT和HtrA1在小鼠脂肪组织血管基质细胞和脂肪细胞,以及3T3-L1细胞分化过程的表达;比较正常和肥胖的小鼠脂肪组织中的DPT表达差异,比较正常、肥胖及短期高脂喂养不同阶段的小鼠脂肪中的HtrA1表达差异;3T3-L1脂肪细胞分别给予一定浓度的罗格列酮和氯化钴处理,检测DPT和HtrA1的表达变化。结果:1)DPT在脂肪中的基础表达较高;DPT主要由脂肪细胞合成和分泌;高脂饮食诱导小鼠白色脂肪组织中DPT表达明显增高;罗格列酮下调3T3-L1脂肪细胞中DPT表达。2)HtrA1在脂肪中的基础表达较高;HtrA1在脂肪中主要由脂肪细胞合成和分泌;短期高脂诱导小鼠皮下脂肪中的HtrA1表达明显增高;缺氧上调3T3-L1脂肪细胞中的HtrA1表达。结论:我们的研究描述了不同代谢状态下脂肪组织中的DPT和HtrA1表达差异明显,这提示它们均可能参与肥胖发生的脂肪组织重构过程,但其内在机制尚不明确。
【学位单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R589.2
【部分图文】：

表达谱,人类,器官,棕色脂肪

上海交通大学硕士学位论文实验结果T在人类和小鼠的白色脂肪中的基础表达较高首先通过搜索《Science》上的一项人类蛋白质图谱研究和HPA数据库，两的数据来自RNA-sequence。结果发现DPT在大多数人类组织和器官中均有其mRNA表达水平在脂肪、输卵管、心肌和平滑肌等组织中表达较高，但织中的基础表达最高（图1）。另外我们利用GEO数据库发现，DPT mRN各组织和器官中的表达与在人类类似，同样在脂肪中表达最高（图2）。DPT在小鼠中的组织表达谱，我们检测6周龄小鼠皮下、内脏、棕色脂肪腓肠肌和比目鱼肌中DPT表达。RT-PCR和Western Blot结果显示，DPT在脂肪中表达最高，其次是棕色脂肪，但在骨骼肌中的表达较低（图3）。

表达谱,器官,棕色脂肪,脂肪

各组织和器官中的表达与在人类类似，同样在脂肪中表达最高（图2）。DPT在小鼠中的组织表达谱，我们检测6周龄小鼠皮下、内脏、棕色脂肪腓肠肌和比目鱼肌中DPT表达。RT-PCR和Western Blot结果显示，DPT在脂肪中表达最高，其次是棕色脂肪，但在骨骼肌中的表达较低（图3）。图1 DPT在人类组织和器官中的表达谱Figure 1 Expression profile of DPT in tissues and organs of human

脂肪组织,骨骼肌,小鼠,蛋白

a：P＜0.001，与皮下脂肪组织组比较（n=6）；B. Western Blot图3 DPT mRNA和蛋白在小鼠脂肪组织和骨骼肌中的表达Figure 3 Expression of DPT in adipose tissue and skeletal muscle of mouseT主要由脂肪细胞合成和分泌接下来为进一步分析DPT在脂肪组织中的主要表达来源，我们分离了6周C57BL/6J雄性小鼠的白色（皮下及内脏）脂肪组织的SVFs和脂肪细胞，检基因在白色脂肪组织的主要表达来源。RT-PCT和Western Blot分别检测DPs和脂肪细胞中的mRNA和蛋白表达水平，结果发现无论是mRNA还是蛋白DPT在成熟脂肪细胞中的表达水平均明显高于在SVF中的表达（图4）。将脂肪组织中分离出的SVFs在体外诱导分化为成熟脂肪细胞，首先检测SV程的成脂分化标志基因PPARγ和CEBP/α表达变化，两者均随着分化时间的

【相似文献】