miRNA-16，miRNA-150和miRNA-155在类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞中的表达及临床相关性研究

发布时间：2020-10-22 11:10

　　 目的:比较类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者与高危人群及健康人群的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中miRNA-16,miRNA-150和miRNA-155表达水平的差异,分析患者miRNA-16,miRNA-150和miRNA-155表达水平与其抗环瓜氨酸肽抗体(CCP),类风湿因子(RF),C-反应蛋白(CRP),红细胞沉降率(ESR)的结果是否存在相关性,初步探索miRNA-16,miRNA-150和miRNA-155在RA中的作用机制,为RA的诊断提供可靠的实验室指标。方法:选取符合类风湿性关节炎诊断标准的患者71例,类风湿性关节炎高危人群(EULAR评分小于6分者)46例,健康对照人群40例作为对照组,取空腹外周血2ml,应用差速密度梯度离心法分离得到外周血单个核细胞后再提取总RNA。对得到的总RNA进行反转录得到cDNA,然后应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术检测miRNA-16,miRNA-150和miRNA-155的含量。与常规临床诊断类风湿性关节炎的实验室指标CCP,RF,CRP,ESR的结果进行比较,进一步分析miRNA-16,miRNA-150和miRNA-155与类风湿性关节炎的关系。构建受试者工作特征曲线(ROC曲线),通过比较曲线下面积(area under the curve,AUC)分析miRNA-16,miRNA-150和miRNA-155及三者的联合检测诊断类风湿性关节炎的价值。结果:1.RA患者外周血单个核细胞中的miRNA-16表达量与其CCP,RF,CRP,ESR的结果正相关(p0.05);miRNA-150的表达量也与其CCP,RF,CRP,ESR的结果正相关(p0.05);而miRNA-155的表达量与CCP,RF,CRP的结果正相关(p0.05),与ESR无相关性(p0.05)。2.高危人群组外周血单个核细胞中的miRNA-16表达量与其CCP,RF的结果正相关(p0.05),与CRP和ESR的结果不相关性(p0.05);mi RNA-150的表达量与其CCP结果正相关(p0.05),与RF,CRP,ESR的结果不相关(p0.05);而miRNA-155表达量与其CCP,RF,CRP,ESR的结果不相关(p0.05)。3.外周血单个核细胞中的miRNA-16表达量在RA患者和健康对照组,以及高危人群和健康对照组之间有统计学差异(p0.05),在RA患者与高危人群无统计学差异(p0.05);miRNA-150的表达量在RA患者和健康对照组,以及高危人群和健康对照组之间有统计学差异(p0.05),在RA患者与高危人群之间无统计学差异(p0.05);miRNA-155的表达量在RA组与高危组,RA组和健康对照组之间有统计学差异(p0.05),在高危人群和健康对照组之间无统计学差异(p0.05)。4.在EULAR评分的基础上,构建的ROC曲线,miRNA-16,miRNA-150和miRNA-155以及三者联合,应用于诊断RA时,AUC分别为0.662,0.650,0.544和0.814,灵敏度分别为67.6%,70.4%,64.3%和82.9%,特异性分别为54.5%,51.7%,53.8%和65.5%。.结论:1.mi RNA-16、mi RNA-150和miRNA-155在RA患者及RA高危组PBMCs中表达升高,提示miRNA-16、miRNA-150和miRNA-155可能与RA发病有关。2.RA患者组的miRNA-16、miRNA-150和miRNA-155与CCP,RF,CRP是正相关,提示三者可能与RA的活动程度相关。3.在EULAR评分的基础上,mi RNA-16,mi RNA-150和miRNA-155联合应用于诊断RA相较于三者的单独应用具有更好的诊断价值。
【学位单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R593.22
【部分图文】：

⑴ 起始模板变性反应（1 个循环）：95℃ 15 分钟⑵ 高富集低丰度目标 miRNA，无需收集荧光信号（5 个循环）：94℃ 20 秒62℃ 30 秒72℃ 34 秒⑶PCR 循环中模板变型（40 个循环）:94℃ 20 秒⑷退火延伸（40 个循环）：72℃ 34 秒⑸为了能够观察到扩增曲线是否出现非特异性扩增，所以要对扩增曲线进行分析，特别需要注意的是以下两点：首先，熔解曲线的波峰有且只有一个；再次，不同样本检测同一个目的 miRNA，该 miRNA 的熔解曲线的峰值所对应的温度必须为同一温度。每个样本应做 3 个复孔，共计 4 孔，其中 U6 作为内参基因检测 miRNA-16，miRNA-150 和 miRNA-155 的 Ct 值。

miRNA-16熔解曲线

miRNA-150 和 miRNA-155 在类风湿性关节兰州大学硕士论文 炎患者外周血单个核细胞中的表达及临床相关性研究图 3.2 miRNA-16 熔解曲线
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本文编号：2851515