IL-6和TNF-α经NF-κB-miR-34a/miR-31-Foxp3信号轴导致Treg/Th17细胞失衡

发布时间：2021-02-27 11:52

　　目的:在本实验室前期生物信息学和实验研究的基础上,本研究通过在体外诱导分泌白细胞介素17的辅助性T（Interlukin-17 producing helper T,Th17）细胞和调节性T（regulatory T,Treg）细胞,探讨肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）及白细胞介素6（Interlukin-6,IL-6）等通过调控miR-34a和miR-31的表达,继而miRNAs引起Treg细胞中叉头/翼状螺旋转录因子3（Forkhead/winged helix transcription factor 3,Foxp3）的表达水平的变化,使得表达Foxp3的Treg细胞与表达维甲酸相关核孤儿受体γt（RAR-related orphan receptor gamma,RORγt）的Th17细胞间的比例失衡,进一步导致以异常炎症反应为特征的自身免疫性疾病的发生。部分阐明在炎症因子的作用下miRNAs导致Treg/Th17细胞失衡的机制有助于更深入地揭示一些自身免疫性疾病的发病机制,为自身免疫性疾病的治疗提供理论依据。方法:在以往生物信... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：100 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 自身免疫性疾病
        1.1.1 Treg细胞与自身免疫性疾病
        1.1.2 Th17细胞与自身免疫性疾病
        1.1.3 炎症微环境与Treg/Th17比例失衡
    1.2 miRNA
        1.2.1 miRNA的生物合成与作用机制
        1.2.2 miRNA与免疫
        1.2.3 miRNA与自身免疫性疾病
    1.3 NF-κB及其信号通路
        1.3.1 NF-κB通路概述
        1.3.2 NF-κB与免疫
        1.3.3 NF-κB与自身免疫性疾病
    1.4 小结
第二章 本研究的目的、内容、方法、实验方案以及意义
    2.1 研究目的
    2.2 研究内容
    2.3 研究方法
    2.4 实验方案
        2.4.1 体外验证miR-34a和miR-31对Foxp3表达水平的调控
+细胞中miR-34a和miR-31的表达水平">        2.4.2 探讨Foxp3⁺细胞中miR-34a和miR-31的表达水平
        2.4.3 IL-6、TNF-α 介导miR-34a和miR-31调控Foxp3的机制初探
    2.5 研究意义
第三章 实验材料与方法
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物与试剂
        3.1.2 主要仪器和耗材
        3.1.3 主要溶液配制
    3.2 实验内容与方法
        3.2.1 体外验证miR-34a和miR-31对Foxp3表达水平的调控
            3.2.1.1 相关质粒图谱及引物
            3.2.1.2 小鼠逆转录病毒重组质粒MGP-31构建
            3.2.1.3 小鼠慢病毒重组质粒p LV-miR-31构建
            3.2.1.4 质粒转染HEK-293T细胞
            3.2.1.5 qPCR检测miR-34a、miR-31和Foxp3 mRNA水平
            3.2.1.6 Immunoblot技术检测Foxp3蛋白水平
+细胞中miR-34a和miR-31的表达水平">        3.2.2 Foxp3⁺细胞中miR-34a和miR-31的表达水平
            3.2.2.1 体外诱导iTreg细胞
            3.2.2.2 qPCR检测Foxp3 mRNA、miR-34a和miR-31的表达水平
+ EL4细胞">            3.2.2.3 体外Foxp3⁺ EL4细胞
            3.2.2.4 普通PCR检测Foxp3基因水平，qPCR检测Foxp3 mRNA、miR-34a和miR-31
        3.2.3 IL-6、TNF-α 介导miR-34a和miR-31调控Foxp3的机制初探
            3.2.3.1 体外诱导小鼠Th17细胞
            3.2.3.2 qPCR检测miR-34a和miR-31的表达水平
+T和EL4细胞">            3.2.3.3 IL-6 及TNF-α 分别刺激小鼠CD4⁺T和EL4细胞
            3.2.3.4 qPCR检测miR-34a和miR-31的表达水平
            3.2.3.5 IL-6 刺激Treg细胞
            3.2.3.6 流式细胞术鉴定Treg细胞
+ EL4细胞">            3.2.3.7 IL-6、TNF-α 及NF-κB抑制剂分别刺激Foxp3⁺ EL4细胞
            3.2.3.8 Immunoblot技术检测NF-κB活性以及Foxp3表达水平
            3.2.3.9 qPCR检测miR-34a和miR-31的表达水平
        3.2.4 统计学方法
第四章 实验结果及讨论
    4.1 体外验证miR-34a和miR-31对Foxp3表达水平的调控
        4.1.0 aMGP-31逆转录病毒重组质粒构建成功
        4.1.1 bpLV-miR-31慢病毒重组质粒构建成功
        4.1.2 miR-31抑制Foxp3 mRNA水平
        4.1.3 miR-34a和miR-31抑制Foxp3的蛋白水平
        4.1.4 小结
+细胞中miR-34a和miR-31的表达水平">    4.2 Foxp3⁺细胞中miR-34a和miR-31的表达水平
        4.2.1 iTreg细胞中Foxp3与miR-34a和miR-31的表达水平呈负相关
+ EL4细胞中Foxp3与miR-34a和miR-31的表达水平呈负相关">        4.2.2 Foxp3⁺ EL4细胞中Foxp3与miR-34a和miR-31的表达水平呈负相关
        4.2.3 小结
    4.3 IL-6、TNF-α 介导miR-34a和miR-31调控Foxp3的机制初探
        4.3.1 Th17细胞中miR-34a和miR-31的表达水平上调
        4.3.2 IL-6 和TNF-α 上调miR-34a和miR-31的表达水平
        4.3.3 IL-6 和TNF-α 抑制Foxp3蛋白水平
        4.3.4 NF-κB参与miR-34a和miR-31对Foxp3表达的调控
        4.3.5 小结
    4.4 讨论
第五章 主要结论与展望
    5.1 主要结论
    5.2 展望
参考文献
综述：小鼠Treg细胞治疗自身免疫性疾病的实验室研究进展
    综述参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的文章及参加的会议



本文编号：3054191