基于Wnt/β-catenin信号通路研究黄精多糖促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化及其作用机制

发布时间：2021-03-01 02:40

　　背景与目的：骨质疏松症（osteoporosis）是一种进行性全身性骨代谢性疾病,以骨量减少和骨组织微结构破坏为特征,导致骨质脆性增加和易于骨折。目前全世界约2亿人患有骨质疏松症,其发病率已跃居常见病、多发病的第7位。目前,用于治疗骨质疏松症的药物在一定程度上能减轻骨质疏松症患者的临床症状,提高骨密度,改善骨微结构,降低骨折风险,但大多数药物长期疗效不明确,缺乏安全性,长期用药费用昂贵,患者依从性差。课题组前期的研究发现,黄精的主要活性成分黄精多糖可以抑制骨质疏松症大鼠模型的骨吸收,改善骨质流失,起到防治骨质疏松症的作用,但其作用机制尚未明确。本实验基于Wnt/β-catenin信号通路探讨黄精多糖对体外诱导骨髓间充质干细胞向成骨分化的促进作用及其可能的作用机制。方法：（1）小鼠骨髓间充质干细胞的培养,显微镜下观察细胞形态变化；（2）MTT法测定不同浓度黄精多糖对BMSCs细胞增殖的影响；（3）在成骨诱导培养液诱导下,五个实验组给予终浓度为5、10、25、50、100mg/L的黄精多糖进行干预,对照组加等量的无血清培养基,显微镜下观察细胞形态变化；（4）诱导14天后,PNPP法检测碱性... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

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个人简历
本文主要英文缩略词索引
摘要
Abstract
前言
第一部分 黄精多糖促进骨髓来源的间充质干细胞向成骨细胞分化
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 细胞株
            1.1.2 主要仪器设备
            1.1.3 主要耗材
            1.1.4 药物与主要试剂
            1.1.5 主要试剂的配制
        1.2 方法
            1.2.1 小鼠间充质干细胞的培养
            1.2.2 实验分组及细胞接种
            1.2.3 MTT法测定黄精多糖对BMSCs细胞增殖的影响
            1.2.4 碱性磷酸酶活性检测
            1.2.5 茜素红染色检测矿化结节
            1.2.6 实时荧光定量PCR检测成骨相关基因
            1.2.7 统计学分析
    2 结果
        2.1 BMSCs细胞生长情况及形态学变化
        2.2 黄精多糖对细胞增殖的影响
        2.3 黄精多糖能显著提高BMSCs碱性磷酸酶活性
        2.4 黄精多糖能明显增强BMSCs细胞外基质矿化
        2.5 黄精多糖能明显促进BMSCs成骨分化相关基因的mRNA的表达
    3 讨论
    4 小结
第二部分 黄精多糖通过Wnt/β-catenin信号通路调控BMSCs向成骨细胞分化
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 细胞株
            1.1.2 主要仪器设备
            1.1.3 主要耗材
            1.1.4 主要试剂
            1.1.5 主要试剂的配制
        1.2 方法
            1.2.1 qRT-PCR检测β-catenin基因的表达
            1.2.2 Western Blot检测β-catenin蛋白的表达
            1.2.3 免疫荧光染色鉴定β-catenin入核
            1.2.4 双荧光素酶报告基因的检测
            1.2.5 统计学分析
    2 结果
        2.1 黄精多糖上调BMSCs细胞总β-catenin和细胞核β-catenin的表达
        2.2 黄精多糖能促进BMSCs β-catenin向细胞核内转移和定位
        2.3 黄精多糖促进β-catenin/TCF/LEF转录活性
    3 讨论
    4 小结
参考文献
文献综述：骨质疏松症药物治疗研究现状
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]二膦酸盐类药物学术研究进展——治疗绝经后骨质疏松症的疗效和药物性[J]. 崔凯,马爱霞.  现代商贸工业. 2016(09)
[2]骨质疏松治疗促骨形成与抗骨吸收药物序贯或联合应用[J]. 盛志峰,陈瑜,廖二元.  中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志. 2015(03)
[3]骨质疏松性骨折患者抗骨质疏松治疗与管理专家共识[J].   中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志. 2015(03)
[4]绝经后女性骨质疏松的治疗[J]. 张慧欣,郑源强,韩新荣.  中国妇幼保健. 2015(12)
[5]中国大陆地区以-2.5SD为诊断的骨质疏松症发病率文献回顾性研究[J]. 张智海,刘忠厚,石少辉,李艳宁.  中国骨质疏松杂志. 2015(01)
[6]调控成骨细胞分化及骨形成关键信号通路的研究进展[J]. 徐练,孔清泉.  中国修复重建外科杂志. 2014(12)
[7]鲫鱼卵唾液酸糖蛋白对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善作用[J]. 王姗姗,周晓春,李秀秀,薛长湖,王静凤.  食品科学. 2014(13)
[8]黄精多糖对小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中PINP和BMP-2表达的影响[J]. 曾高峰,宗少晖,邹斌,李柯柯.  天然产物研究与开发. 2014(08)
[9]中医药治疗骨质疏松症研究现状及进展[J]. 江婷,方朝晖.  中医药临床杂志. 2014(05)
[10]近五年中西医结合治疗原发性骨质疏松症的临床研究进展[J]. 李鼎鹏,谢兴文,宋敏,侯费祎,赵永利.  中国骨质疏松杂志. 2014(03)



本文编号：3056843