高尿酸背景下P2X7R不同SNPs位点突变的功能研究

发布时间：2021-03-01 08:47

　　目的前期研究表明ATP作用于P2X7R可能是诱发痛风性关节炎发作的第二信号。本研究通过建立稳定表达P2X7R的野生型或突变体型THP-1源性单核细胞系,并在高尿酸背景下分析P2X7R的野生型和三种不同SNPs基因型的功能改变。方法慢病毒转染HEK-293T细胞,并观察HEK-293T细胞对溴化乙锭的摄取能力从而在P2X7通道上观察Ala 348>Thr,Glu 496>Ala和Arg 307>Gln三种不同突变体对P2X7R的影响。另外,慢病毒转染THP-1细胞,建立稳定表达野生型或突变体型的THP-1细胞系,设置野生型、突变体型或空病毒型三型,每型分三组,分别加入MSU（标记M组）、MSU+ATP（标记MA组）,空病毒对照组（标记C组）。PMA分别刺激三组细胞,离心撤去PMA;M组和MA组中加入MSU孵育,之后MA组中加入ATP孵育;分别收集三组细胞上清和细胞。ELISA法检测三组上清中IL-1β蛋白表达水平,q RT-PCR检测三组细胞IL-1β,NLRP3,ASC和Caspase-1 m RNA表达水平。SPSS软件用于分析数据,P<0.05差异有统计学意... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

已转染野生型和三种突变体型慢病毒的HEK-293T细胞对溴化乙锭摄取的平均荧光强度的对比

安徽医科大学硕士学位论文32图2.在Ala348>Thr,Glu496>Ala和Arg307>Gln突变体型中IL-1β表达水平的比较(A)Ala348>Thr野生型和空病毒型上清液IL-1β表达水平比较.(B)Ala348>Thr野生型和空病毒型中IL-1βmRNA表达水平比较.(C)Glu496>Ala野生型和空病毒型中上清液IL-1β表达水平比较.(D)Glu496>Ala野生型和空病毒型中IL-1βmRNA表达水平比较.(E)Arg307>Gln野生型和空病毒型中上清液IL-1β表达水平比较.(F)Arg307>Gln野生型和空病毒型中IL-1βmRNA表达水平比较.Fig2.ComparisonoftheIL-1βlevelsinAla348toThr,Glu496toAlaandArg307toGlnmutations(A)ComparisonoftheIL-1βlevelsinAla348toThr,wide-typeandemptyvirusinserum.(B)ComparisonoftheIL-1βmRNAexpressionsinAla348toThr,wide-typeandemptyvirus.(C)ComparisonoftheIL-1βlevelsinGlu496toAla,wide-typeandemptyvirusinserum.(D)ComparisonoftheIL-1βmRNAexpressionsinGlu496toAla,wide-typeandemptyvirus.

安徽医科大学硕士学位论文34图3.在Ala348>Thr,Glu496>Ala和Arg307>Gln突变体型中NLRP3基因表达水平比较(A)Ala348>Thr野生型和空病毒型中NLRP3mRNA表达水平比较.(B)Glu496>Ala野生型和空病毒型中NLRP3mRNA表达水平比较.(C)Arg307>Gln野生型和空病毒型中NLRP3mRNA表达水平比较.Fig3.ComparisonofthegeneexpressionofNLRP3inAla348toThr,Glu496toAlaandArg307toGlnmutations(A)ComparisonofthemRNAexpressionofNLRP3inAla348toThr,wide-typeandemptyvirus.(B)ComparisonofthemRNAexpressionofNLRP3inGlu496toAla,wide-typeandemptyvirus.(C)ComparisonofthemRNAexpressionofNLRP3inArg307toGln,wide-typeandemptyvirus.*p<0.05,***p<0.001.3.4携带不同突变体的THP-1细胞中ASC的mRNA表达水平在高尿酸背景下，分别检测THP-1细胞中ASC的mRNA表达水平。在MA组中，Ala348>Thr突变体型细胞中的ASC基因mRNA表达水平相比野生型，差异无统计学意义（P＞0.05）；Ala348>Thr突变体型细胞中的ASC


本文编号：3057243