雌二醇通过G蛋白偶联雌激素受体30 （GPR30）/ERK1/2信号通路调节MC3T3-E1细胞线粒体自噬的分子机制研究

发布时间：2021-03-02 23:05

　　目的:骨质疏松是由多种因素引起的骨量降低的代谢性骨病,临床表现易发生骨折及骨骼疼痛。随着人口老龄化的发展趋势,骨质疏松的发病率及病死率逐年上升,给每个家庭和国家带来的经济负担也越来越大。原发性骨质疏松患者中,绝经后女性的患病率为男性的4倍,妇女由开始绝经起,因雌二醇程度下降,致使骨量损失增加,骨质疏松比例也明显提高,其重要的治疗方法之一就是补充外源性雌激素。雌激素水平下降是女性绝经后骨质疏松的主要原因。雌激素是一类有普遍生物活性的类固醇化合物,她有促成和维持女性生殖器和第二性征的生理功用,它对内分泌系统、骨骼的生长与成熟、心血管体系、四肢代谢、皮肤等方面都有重要作用。已有研究表明,雌激素主要通过直接方式与成骨细胞结合影响其增值代谢,然而对于破骨细胞的作用则是通过作用于成骨细胞使其分泌Fasl,Fas/Fasl途径经过旁分泌的形式结合破骨细胞诱导破骨细胞的凋亡。因此,我们选择了MC3T3-E1鼠成骨细胞系作为实验对象,来验证雌二醇对骨代谢的作用。成骨细胞凋亡已经证实是骨质疏松发病的重要原因,而同样作为细胞终末调节途径的自噬在骨质疏松中的作用一直未被研究清楚,因此本实验旨在研究雌激素对成骨... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：86 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

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图 3.1 雌二醇对 GPR30 蛋白活性表达的影响。MC3T3-E1 细胞给予不同浓度的雌二醇处理 48 小时。A: Western blot 法测定 GPR30 蛋白表达， B: RT-PCR 法测定 GPR30 mRNA 表达。与对照组相比，* P＜0.05。3.2 MC3T3-E1 细胞中 GPR30 在最适雌二醇浓度下的表达上述实验证明 10-7M 雌二醇为 GPR30 表达的最佳浓度，因此接下来我们用 10-7M 的雌二醇干预 MC3T3-E1 成骨细胞 48h，并应用免疫荧光显微镜观察 GPR30 的表达情况，研究结果显示，10-7M 雌二醇处理后的 MC3T3-E1 细胞中存在 GPR30的表达,并且主要在细胞膜上，细胞质和质膜中也有。

图 8.1 雌二醇引起 MC3T3-E1 细胞线粒体自噬体增多并且自噬被 G15 抑制通过透射性电子显微镜，查看线粒体自噬小体的形成。图 A 为 control 组，图 B 为加入 10-7M 雌二醇处理的 17β-E2 组，图 C 为 17β-E2+G15 组，即加入 10-7M 雌二醇前，细胞经 G15 预处理 1h。17β-E2 组线粒体自噬体明显高于其他两组，而 control 组与 17β-E2+G15组无显著性差异。图中箭头所示为线粒体自噬小体，N 为细胞核，放大倍数为 X12000，标尺=2um。8.2 雌二醇及 GPR30 对线粒体蛋白及溶酶体蛋白共定位的影响Tom20 为线粒体外膜蛋白，Lamp2 为溶酶体膜蛋白，通过标记线粒体膜蛋白与溶酶体膜蛋白共定位可以使线粒体自噬可视化。我们通过免疫荧光显微镜观察发现，在 MC3T3-E1 细胞中存在 Tom20 与 Lamp2 共定位，即细胞中存在线粒体自噬。研究结果显示，与对照组相比，仅加入 10-7M 雌二醇的 17β-E2 组


本文编号：3060121