硫代乙酰胺诱导骨髓间充质干细胞向破骨细胞分化的研究
发布时间：2021-03-05 22:34
目的探讨硫代乙酰胺（TAA）体外诱导BMSCs向破骨样细胞的分化,分析诱导过程中破骨样细胞形态、蛋白表达和骨代谢标志物表达水平的变化,为TAA导致骨质疏松症的毒性研究提供实验依据。方法1.体外无菌分离,培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）并对细胞进行表面分子检测。2.CCK-8实验筛选硫代乙酰胺诱导BMSCs细胞分化的最佳作用浓度;CFSE检测硫代乙酰胺对BMSCs细胞分裂的影响。3.流式细胞术检测TAA对细胞凋亡,周期的影响;Western Blot法检测凋亡相关蛋白的表达的变化4.抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色对BMSCs分化的破骨细胞进行特异性形态学染色5.Western Blot法检测破骨细胞特异性蛋白表达的变化6.免疫荧光法检测破骨细胞特异性蛋白表达的变化7.Fluo-3 AM荧光检测BMSCs细胞内钙离子的变化8.电化学发光法检测BMSCs骨代谢标志物的变化结果1.在体外无菌分离并培养具有干细胞标志物的大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,可以用于本次实验研究。2.CCK-8实验结果显示:TAA能抑制BMSCs细胞增殖,并且呈剂量-时间依赖性;CFSE结果显示TAA能抑...
【文章来源】：浙江中医药大学浙江省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
光镜下观察原代培养的BMSCs生长形态
图 2：流式细胞术检测 BMSCs 表面 CD 分子注：a， b，c， d 分别是检测 CD90-FITC，CD29-PE，CD45-FITC，CD11b/c-PE 结果；Iso Con 即为相应 CD 分子的同型对照组；control 为未加任何一抗的空白对照组。（三）TAA 对 BMSCs 细胞增殖活力的影响CCK-8 结果显示，TAA 作用于细胞能抑制细胞的增殖，导致细胞存活率下降。较低浓度 TAA（0.5mg/mL，1mg/mL）作用细胞 24h 后，细胞存活率下降幅度较小；较高浓度 TAA（1.5 mg/mL，2mg/mL）作用细胞后导致存活率下降至50％；TAA 作用 72h 后细胞存活率达到稳定平台。考虑到 TAA 对细胞的损伤作用，我们选择 0.5 mg/mL，1mg/mL 作为后续实验中 TAA 的给药浓度。
图 3 硫代乙酰胺对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响注：图中以时间为横坐标，细胞活力（与对照组相比）为纵坐标，实验分组中硫代乙胺的浓度分别为 0.5 mg/mL, 1 mg/mL, 1.5 mg/mL, 2mg/mL；设立空白对照组。（四）TAA 对 BMSCs 细胞分裂的影响CFSE 结果显示 TAA 浓度为 0.5 mg/mL，1 mg/mL 时细胞分裂指数分别为54.1%±1.5%和 51.8%±1.9%，与对照组(63.2%±3.3%)比较具有显著差异（P＜0.0
【参考文献】：
期刊论文
[1]骨关节病变及骨折患者围术期骨代谢标志物检测及骨密度变化[J]. 李士红,刘阳. 中国组织工程研究. 2016(35)
[2]肝纤维化动物模型制备的常用方法及其MRI检测的研究进展[J]. 赵广强,张闽光. 医学影像学杂志. 2015(03)
[3]Cytokines as biochemical markers for knee osteoarthritis[J]. Thomas Mabey,Sittisak Honsawek. World Journal of Orthopedics. 2015(01)
[4]骶髂关节紊乱与腰椎间盘退变之间相关性的流行病学研究与生物力学分析[J]. 师宁宁,沈国权,何水勇,郭汝宝. 中国骨伤. 2014(07)
[5]硫代乙酰胺诱导的斑马鱼急性肝损伤模型[J]. 齐玉娟,张靖溥. 药物分析杂志. 2014(05)
[6]Protective effect of omeprazole on gastric mucosal of cirrhotic portal hypertension rats[J]. Wei Gao,Hai-Ying Li,Li-Xin Wang,Li-Jun Hao,Jian-Li Gao,Rong-Juan Zheng,Chun-Jiang Cai,Yan-Ling Si. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2014(05)
[7]骨质疏松的发病机制与危险因素[J]. 王宁,刘玉杰. 中国骨质疏松杂志. 2013(05)
[8]重组人骨保护素与重组核因子κb活化因子受体蛋白对破骨前体细胞分化的影响[J]. 熊琦,张里程,张立海,姚琦,唐佩福. 中国骨伤. 2013(04)
[9]RNAi:antiviral therapy against dengue virus[J]. Sobia Idrees,Usman A Ashfaq. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 2013(03)
[10]绝经后妇女骨质疏松症患者血清β-Crosslaps、PINP和N-MID检测的评价[J]. 欧萌萌,黄建荣. 标记免疫分析与临床. 2011(04)
本文编号：3065984
【文章来源】：浙江中医药大学浙江省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
光镜下观察原代培养的BMSCs生长形态
图 2：流式细胞术检测 BMSCs 表面 CD 分子注：a， b，c， d 分别是检测 CD90-FITC，CD29-PE，CD45-FITC，CD11b/c-PE 结果；Iso Con 即为相应 CD 分子的同型对照组；control 为未加任何一抗的空白对照组。（三）TAA 对 BMSCs 细胞增殖活力的影响CCK-8 结果显示，TAA 作用于细胞能抑制细胞的增殖，导致细胞存活率下降。较低浓度 TAA（0.5mg/mL，1mg/mL）作用细胞 24h 后，细胞存活率下降幅度较小；较高浓度 TAA（1.5 mg/mL，2mg/mL）作用细胞后导致存活率下降至50％；TAA 作用 72h 后细胞存活率达到稳定平台。考虑到 TAA 对细胞的损伤作用，我们选择 0.5 mg/mL，1mg/mL 作为后续实验中 TAA 的给药浓度。
图 3 硫代乙酰胺对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响注：图中以时间为横坐标，细胞活力（与对照组相比）为纵坐标，实验分组中硫代乙胺的浓度分别为 0.5 mg/mL, 1 mg/mL, 1.5 mg/mL, 2mg/mL；设立空白对照组。（四）TAA 对 BMSCs 细胞分裂的影响CFSE 结果显示 TAA 浓度为 0.5 mg/mL，1 mg/mL 时细胞分裂指数分别为54.1%±1.5%和 51.8%±1.9%，与对照组(63.2%±3.3%)比较具有显著差异（P＜0.0
【参考文献】：
期刊论文
[1]骨关节病变及骨折患者围术期骨代谢标志物检测及骨密度变化[J]. 李士红,刘阳. 中国组织工程研究. 2016(35)
[2]肝纤维化动物模型制备的常用方法及其MRI检测的研究进展[J]. 赵广强,张闽光. 医学影像学杂志. 2015(03)
[3]Cytokines as biochemical markers for knee osteoarthritis[J]. Thomas Mabey,Sittisak Honsawek. World Journal of Orthopedics. 2015(01)
[4]骶髂关节紊乱与腰椎间盘退变之间相关性的流行病学研究与生物力学分析[J]. 师宁宁,沈国权,何水勇,郭汝宝. 中国骨伤. 2014(07)
[5]硫代乙酰胺诱导的斑马鱼急性肝损伤模型[J]. 齐玉娟,张靖溥. 药物分析杂志. 2014(05)
[6]Protective effect of omeprazole on gastric mucosal of cirrhotic portal hypertension rats[J]. Wei Gao,Hai-Ying Li,Li-Xin Wang,Li-Jun Hao,Jian-Li Gao,Rong-Juan Zheng,Chun-Jiang Cai,Yan-Ling Si. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2014(05)
[7]骨质疏松的发病机制与危险因素[J]. 王宁,刘玉杰. 中国骨质疏松杂志. 2013(05)
[8]重组人骨保护素与重组核因子κb活化因子受体蛋白对破骨前体细胞分化的影响[J]. 熊琦,张里程,张立海,姚琦,唐佩福. 中国骨伤. 2013(04)
[9]RNAi:antiviral therapy against dengue virus[J]. Sobia Idrees,Usman A Ashfaq. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 2013(03)
[10]绝经后妇女骨质疏松症患者血清β-Crosslaps、PINP和N-MID检测的评价[J]. 欧萌萌,黄建荣. 标记免疫分析与临床. 2011(04)
本文编号：3065984
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