低酯果胶在预防1型糖尿病中的作用及机制研究
发布时间：2021-03-31 22:08
1型糖尿病（T1D）是一种主要以胰岛β细胞受损为特征的自身免疫性疾病。作为世界性医疗难题,几十年来一直缺乏有效的治疗方法。大量研究表明,肠道稳态失衡是诱发T1D的重要因素,同时,低酯果胶（LMP）具有维持肠道稳态的作用,但是几乎没有LMP与T1D的相关报道。为了探究LMP膳食干预对T1D发病的影响及作用机制,首先,本文通过对4周龄雌性非肥胖糖尿病（NOD）小鼠进行持续40周的5%LMP膳食干预,观察日常膳食中添加LMP对NOD小鼠发病率及肠道稳态的影响并初步探究LMP的作用机理。随后,通过体外模拟肠道炎症环境,筛选到LMP作用靶点并初步确认LMP维持肠道稳态依赖于组蛋白去甲基化酶KDM5a。由于肠道稳态失衡会诱发炎症性肠病,接下来,我们抑制或过表达KDM5a,以此确认KDM5a表达对结肠炎小鼠肠道稳态的影响及阐明潜在作用机理。最后,我们在NOD小鼠中抑制或过表达KDM5a,观察KDM5a的表达对NOD小鼠发病率及免疫调节的影响,并阐明潜在作用机理。本研究主要结果如下:经40周的膳食干预,53.8%的膳食干预组小鼠发病而正常膳食组小鼠全部发病。膳食干预小鼠胰岛炎严重程度、胰腺和盲肠炎症水...
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：103 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
肠屏障示意图
江南大学博士学位论文142.2.4动物实验设计与实验操作首先，将小鼠分为两组：正常膳食组（NOD）和低酯果胶干预组（NOD+LMP）。小鼠无限制饮水和采食，从第10周起进行每周一次的空腹血糖监测，直到其中一组小鼠全部发病则停止监测（n=20）。同期进行的平行试验中，于第22周处死小鼠，收集样本进行实验（n=10）。其次，确认LMP的作用后按如图2-1中时间节点对小鼠进行抗生素和粪菌移植的实验（n=6）。图2-1实验设计Fig.2-1ExperimentaldesignofLMP,ABXandMTtreatment将4周龄雌性NOD小鼠随机分为以下7组，具体分组信息见下表。表2-2小鼠分组Table2-2Groupinformation组别名称组别标记备注正常对照组NOD抗生素处理组NOD+ABX粪菌移植组NOD+ABX+MT低酯果胶干预组NOD+LMP低酯果胶干预抗生素处理组NOD+LMP+ABX低酯果胶干预粪菌移植对照组NOD+LMP+ABX+MT(NC)粪菌来源为正常饲料喂饲的NOD小鼠盲肠内容物低酯果胶干预粪菌移植组NOD+LMP+ABX+MT粪菌来源为低酯果胶喂饲的NOD小鼠盲肠内容物NOD小鼠从第4周起分别喂饲正常饲料和5%LMP添加饲料，于第6周进行为期一周的抗生素灌胃处理，无需进行抗生素处理的小鼠灌胃等体积PBS。于第7周进行为期一周的粪菌移植实验，无需进行抗生素处理的小鼠灌胃等体积甘油/PBS溶液。
江南大学博士学位论文202.3.1016srDNA扩增子测序收集小鼠粪便后，提取小鼠肠道内容物中的基因组。送样至华大基因公司进行测序及进行数据分析。其流程为：PCR扩增细菌V4区；回收PCR产物定量；混样，构建文库；测序及生物信息学分析。2.3.11数据统计学分析所有生物学实验皆重复3次后，将数据用GraphPadSoftware7.0（SanDiego，USA）统计软件进行数据分析，实验结果均以平均值±标准误差（Mean±SEM）。两组间数据显著性分析用t值检验（two-tailedStudent’st-test），多组数据两两比较采用单因素方差分析（OneWayANOVA分析）。如果p<0.05则用*表示,p<0.01则用**表示,p<0.001则用***表示，都表示有显著差异。2.4结果与讨论2.4.1LMP膳食干预对NOD鼠发病率的影响1型糖尿病（T1D）是一种机体胰岛细胞遭受自身免疫细胞攻击的而受损引发高血糖症的自身免疫性疾病，低酯果胶（LMP）具有抑制炎症、改善免疫调节的作用，于是为了测试LMP膳食干预对NOD小鼠发病率的影响，我们将4周龄雌性NOD小鼠随机分为两组：喂饲AIN-93G基础饲料的对照组（NOD组）及5%LMP膳食纤维添加组（NOD+LMP组）。经过40周喂饲，发现NOD组小鼠全部发病而只有53.8%的LMP干预小鼠发病（图2-1A）。对比第22周两组小鼠的空腹血糖发现喂饲LMP小鼠的空腹血糖显著低于NOD组小鼠（图2-1B）。由此表明LMP膳食干预能够显著降低NOD小鼠空腹血糖及发病率。图2-1LMP干预降低NOD小鼠发病率及空腹血糖Fig.2-1LMPinterventionreducestheincidenceofT1Dandfastingbloodglucose注：（A）发病率曲线；（B）第22周非发病小鼠空腹血糖2.4.2LMP膳食干预对NOD鼠胰肠区域炎症及免疫反应的影响T1D的发病主要是由于小鼠胰腺组织中胰岛细胞受到损伤，于是LMP干预对小鼠
【参考文献】：
硕士论文
[1]产共轭亚油酸乳酸菌对DSS诱导小鼠结肠炎的改善作用[D]. 王俊通.江南大学 2016
本文编号：3112154
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：103 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
肠屏障示意图
江南大学博士学位论文142.2.4动物实验设计与实验操作首先，将小鼠分为两组：正常膳食组（NOD）和低酯果胶干预组（NOD+LMP）。小鼠无限制饮水和采食，从第10周起进行每周一次的空腹血糖监测，直到其中一组小鼠全部发病则停止监测（n=20）。同期进行的平行试验中，于第22周处死小鼠，收集样本进行实验（n=10）。其次，确认LMP的作用后按如图2-1中时间节点对小鼠进行抗生素和粪菌移植的实验（n=6）。图2-1实验设计Fig.2-1ExperimentaldesignofLMP,ABXandMTtreatment将4周龄雌性NOD小鼠随机分为以下7组，具体分组信息见下表。表2-2小鼠分组Table2-2Groupinformation组别名称组别标记备注正常对照组NOD抗生素处理组NOD+ABX粪菌移植组NOD+ABX+MT低酯果胶干预组NOD+LMP低酯果胶干预抗生素处理组NOD+LMP+ABX低酯果胶干预粪菌移植对照组NOD+LMP+ABX+MT(NC)粪菌来源为正常饲料喂饲的NOD小鼠盲肠内容物低酯果胶干预粪菌移植组NOD+LMP+ABX+MT粪菌来源为低酯果胶喂饲的NOD小鼠盲肠内容物NOD小鼠从第4周起分别喂饲正常饲料和5%LMP添加饲料，于第6周进行为期一周的抗生素灌胃处理，无需进行抗生素处理的小鼠灌胃等体积PBS。于第7周进行为期一周的粪菌移植实验，无需进行抗生素处理的小鼠灌胃等体积甘油/PBS溶液。
江南大学博士学位论文202.3.1016srDNA扩增子测序收集小鼠粪便后，提取小鼠肠道内容物中的基因组。送样至华大基因公司进行测序及进行数据分析。其流程为：PCR扩增细菌V4区；回收PCR产物定量；混样，构建文库；测序及生物信息学分析。2.3.11数据统计学分析所有生物学实验皆重复3次后，将数据用GraphPadSoftware7.0（SanDiego，USA）统计软件进行数据分析，实验结果均以平均值±标准误差（Mean±SEM）。两组间数据显著性分析用t值检验（two-tailedStudent’st-test），多组数据两两比较采用单因素方差分析（OneWayANOVA分析）。如果p<0.05则用*表示,p<0.01则用**表示,p<0.001则用***表示，都表示有显著差异。2.4结果与讨论2.4.1LMP膳食干预对NOD鼠发病率的影响1型糖尿病（T1D）是一种机体胰岛细胞遭受自身免疫细胞攻击的而受损引发高血糖症的自身免疫性疾病，低酯果胶（LMP）具有抑制炎症、改善免疫调节的作用，于是为了测试LMP膳食干预对NOD小鼠发病率的影响，我们将4周龄雌性NOD小鼠随机分为两组：喂饲AIN-93G基础饲料的对照组（NOD组）及5%LMP膳食纤维添加组（NOD+LMP组）。经过40周喂饲，发现NOD组小鼠全部发病而只有53.8%的LMP干预小鼠发病（图2-1A）。对比第22周两组小鼠的空腹血糖发现喂饲LMP小鼠的空腹血糖显著低于NOD组小鼠（图2-1B）。由此表明LMP膳食干预能够显著降低NOD小鼠空腹血糖及发病率。图2-1LMP干预降低NOD小鼠发病率及空腹血糖Fig.2-1LMPinterventionreducestheincidenceofT1Dandfastingbloodglucose注：（A）发病率曲线；（B）第22周非发病小鼠空腹血糖2.4.2LMP膳食干预对NOD鼠胰肠区域炎症及免疫反应的影响T1D的发病主要是由于小鼠胰腺组织中胰岛细胞受到损伤，于是LMP干预对小鼠
【参考文献】：
硕士论文
[1]产共轭亚油酸乳酸菌对DSS诱导小鼠结肠炎的改善作用[D]. 王俊通.江南大学 2016
本文编号：3112154
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