EPO对高糖环境下体外培养心脏成纤维细胞的影响及RhoA/ROCK信号通路在其中的作用

发布时间：2021-04-06 22:32

　　[目的]体外模拟一个高糖环境状态,观察心脏成纤维细胞（Cardiac Fibroblasts CFs）在高糖环境下的生长情况,并进一步探讨高糖环境对CFs的影响、促红细胞生成素（Erythropoietin EPO）对高糖环境诱导下体外培养乳鼠CFs的作用及RhoA/ROCK信号通路在其中的作用。在细胞水平为高糖促进心肌纤维化提供进一步的理论支持；进一步研究在高糖环境下EPO对心脏重构是否仍有保护作用及其中的具体机制；为糖尿病心肌病的防治提供进一步的理论依据。[方法]（1）CFs的培养：取出生1-3天的SD大鼠的心室肌,利用胰蛋白酶+Ⅱ型胶原酶双酶消化法消化心肌组织,采用差速贴壁离心法分离,培养CFs并进行传代,使用生长良好的第2-3代细胞。（2）细胞免疫化学染色鉴定细胞：选取生长良好的第2-3代CFs细胞进行细胞爬片,用PV通用型两步法免疫组织化学试剂盒鉴定CFs细胞。免疫组化结果：纤维连接蛋白（Fibronectin 1） （+）、波形蛋白（Vimentin） （+）、a-肌动蛋白（a-actin） （-）,证实为CFs细胞。（3）不同浓度葡萄糖对于CFs细胞增殖的影响：用不同浓度... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１々离培养ＣＦｓ（ｌＯＯＸ）??

合；继续培养到７２ｈ，可见ＣＦｓ排列紧密，细胞可达８０％－９０％融合；继续进一??步培养，ＣＦｓ生长过密产生接触抑制，有的细胞巧始出现调亡，在光镜下可呈铺??路石样改变。如图所示（图１－１）。??１．２免疫化学染色鉴定细胞??采用ＰＶ二步法免疫组化检测试剂鉴定ＣＦｓ，?ＣＦｓ的Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎｌ、Ｖｉｍｅｎｔｉｎ??蛋白表达为阳性反应（可见胞浆内围绕胞核的区域有栋褐色颗粒状物质生成）；??而必肌特异性ａ横纹肌肌动蛋白（ａ－ａｃｔｉｎ）的表达为阴性（胞浆内无踪褐色颗粒??状物质形成）。由此鉴定该细胞为ＣＦｓ细胞，细胞纯度可达９５％Ｗ上。如图所示??调＾巧。??培养２４小时?培养４８小时?培养后７２小时??图１－１々离培养ＣＦｓ（ｌＯＯＸ）??—３４—??

＊．心壑＇条始１！細＾＇、，?＊、纖：‘如诚兴；Ｖｉｍｅｎｔｉｎ（＋）?Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎｌ（＋）?ａ－ａｃｔｉｎ?（－）??图１－２细胞鉴定结果ＣＦｓ（１００５〇??二、ＣＣＫ－８检测不同浓度葡萄糖对ＣＦｓ细胞增殖的影响??用ＣＣＫ－８检测试剂来检测培养基中不同摩尔浓度的葡萄糖对ＣＦｓ增巧响，分光光度计检测出的吸光度值来反应ＣＦｓ细胞的增巧情况，实验重遍，结果示：不同浓度（５．５ｍｍｏｌ／Ｌ，?ｌＯｍｍｏｌ／Ｌ，?２５ｍｍｏｌ／Ｌ，?５０ｍｍｏｌ／Ｌ＜）葡刺激４８ｈ，可见各组随着糖浓度的増加，对应的吸光光度值也增加并且呈现量依赖性的关系；ｌＯｍｍｏｌ／Ｌ、２５ｍｍｏｌ／Ｌ、５０ｍｍｏｌ／Ｌ組与对照组相比，对应光度值呈上升趋势，对应的Ｐ值分别为：片８．０３Ｘ１０－７、Ｐ＝８．２４Ｘ１０－８、Ｐ＝１．９３Ｘ（戶＜０．０５），差异有统计学差异；２５ｍｍｏｌ／Ｌ组达峰值，５０ｍｍｏｌ／Ｌ组晦有降但５０ｍｍｏｌ／Ｌ和２５ｍｍｏｌ／Ｌ组两组相比，传０．０５无统计学差异。如图所示调


本文编号：3122275