特立帕肽通过调控细胞内活性氧治疗激素性骨质疏松

发布时间：2021-08-04 13:17

　　【目的】从细胞以及动物水平研究特立帕肽对激素性骨质疏松的作用及其相关机制;从细胞水平探究特立帕肽对骨细胞氧化应激的缓解作用以及对地塞米松的拮抗作用;从动物水平构建激素性骨质疏松的大鼠模型,验证特立帕肽的抗骨质疏松作用,并进一步验证AKT通路在其中的作用机制。【方法】第一部分从细胞水平探讨特立帕肽的抗氧化应激作用,分别用地塞米松和特立帕肽处理MLO-Y4细胞系,使用DCFH-DA试剂盒对细胞内的活性氧含量进行检测,使用激光共聚焦显微镜观察荧光强度;同时使用RT-PCR验证有关氧化应激相关基因SOD2 mRNA和CAT mRNA的表达量;使用western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3的活性,以便进一步研究特立帕肽是否对骨细胞有抗凋亡作用。第二部分,建立激素性骨质疏松的模型,并用特立帕肽进行干预,观察其治疗激素性骨质疏松的效果;从直观的角度扫描显微CT,测量骨量相关指标;同时使用western blot探索AKT信号通路在其中的作用机制。 【结果】1.细胞增殖能力的测定:在第0天时各组细胞的增殖能力相同,在第一天时,地塞米松处理组的细胞增殖能力明显低于对照组和特立帕肽处理组,... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：96 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

A，CCK-8测定细胞的增殖能力，可以发现特立帕肽能够促进细胞的增殖，降低地塞米松的副作用；B，免疫荧光观察细胞的增殖能力，可以发现特立帕肽能够促进细胞的增

细胞内活性氧的测定；B，细胞内 SOD2 和 CAT 基因的表达水平；C，细胞增殖实验确定特立帕肽对细胞增殖的影响可通过降低细胞内活性氧水平实现。Con 为对照组；Dex 为地塞米松组；Dex+Teriparatide 为地塞米松+特立帕肽组；Dex+NAC 为地塞米松+NAC组。※代表 P＜0.05。1.2.3 特立帕肽能够通过降低细胞内活性氧的水平抑制细胞的凋亡实验检测了特立帕肽对细胞凋亡的影响，western blot 结果显示：特立帕肽能够显著地降低细胞内 Cleaved caspase-3 和 Bad 蛋白的表达水平并升高 Bcl-2蛋白的表达水平，这说明特立帕肽能够抑制骨细胞的凋亡，而地塞米松能够促进细胞的凋亡，特立帕肽能够逆转地塞米松带来的这种不利作用，结合上述实验结果可以推论：特立帕肽可通过降低细胞内活性氧的水平抑制细胞的凋亡的，而进一步的实验研究结果发现，特立帕肽确实能够通过抑制细胞内 Cleavedcaspase-3 和 BAD 的表达，并促进 Bcl-2 的表达，从而降低细胞凋亡的水平（图1.3）。Dex-++

位论文 二、特立帕肽对大鼠 AKT 通路以及骨mowoil）滴在载玻片上，每片 15μl，将有细胞干后室温约 30min 后放在 4°C，避光保存。分析.0 对数据进行统计分析，定量资料以平均值±标6.0 软件进行统计学作图如柱状图等。符合正态用独立样本 t 检验，三组及以上之间比较采用单数据为非正态分布，则使用非参数 Kruskal-Wa P <0.05。 I 型胶原表达鼠的股骨进行骨细胞原代培养，Western-blot 检对照组相比，地塞米松组 I 型胶原呈低表达，特立帕肽组较地塞米松组 I 型胶原高表达（图


本文编号：3321767