Semaphorin 5A在类风湿关节炎中的表达及其对RWA264.7细胞向破骨细胞分化的影响

发布时间：2021-08-08 11:33

　　目的:研究神经轴突导向分子Semaphorin 5A（Sema 5A）在类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）中的表达特征,了解Sema 5A诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞向破骨细胞分化的作用。方法:1.应用ELISA方法检测62例RA患者与48例健康对照组血清中Sema 5A的浓度,分析其与RA患者疾病活动度、骨破坏程度及各实验室指标的关系;2.以不同浓度 Sema 5A（0,0.5,1,2.5,5μg/ml）处理 RAW264.7 细胞,RANKL及PBS为对照组,培养7天后进行抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色,100倍镜下观察TRAP阳性细胞数量,并计数;3.采用Real-time PCR法检测RAW264.7细胞中TRAP,组织蛋白酶（cathepsin-K,CTSK）和金属基质蛋白酶（matrixmetalloproteinases-9,MMP-9）的mRNA表达水平;4.以 Sema5A（5μg/ml）1ml,处理 RAW264.7 细胞 48 小时,加入 100ng/... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?Ｓｅｍａ?５Ａ在ＲＡ中的表达特点分析??１６??

３．３?Ｓｅｍａ?５Ａ促进ＲＡＷ２６４．７细胞向破骨细胞分化??ＴＲＡＰ染色结果显示，随着Ｓｅｍａ５Ａ浓度增加，ＴＲＡＰ染色阳性的破骨细胞数逐??渐增多（见图２Ａ）。??Ａ）?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＲＡＮＫＬ?（１００ｎｇ／ｍＬ）?Ｓｅｍａ５Ａ（０．５｜ｉｇ／ｍＬ）??Ｓｅｍａ５Ａ?（１?ｐｇ／ｍＬ）?Ｓｅｍａ５Ａ?（２．５｜ｉｇ／ｍＬ）?Ｓｅｍａ５Ａ?（５＾ｇ／ｍＬ）??圓Ｍ３??Ｂ）?＊??Ｉ?１??．?＾?．??ｎ．ｓ．??＿?４〇１?＇?＇??＂ｚ?■?☆?１??Ｊ?３０－??ｒＬＬｉｌ??ＲＡＮＫＵ１００ｎｇ／ｍＬｌ?．?．??Ｓｅｍａ５Ａ（ｎｇ／ｍＬ）?０．５?１?２．５?５??图２?Ｓｅｍａ５Ａ对破骨细胞形成的影响（＊尸＜０．０５，?＊＊尸＜０．０１）??在无ＲＡＮＫＬ的情况下，Ｓｅｍａ５Ａ５（ａｇ／ｍｌ剌激组ＴＲＡＰ阳性细胞数（２４．０士４．４９／??孔），较阴性对照组（３．２５士０．６３／孔）显著增多（尸＜０．０５），而３６１＾５八５吨／〇１１??组与ＲＡＮＫＬ阳性对照组相比，ＴＲＡＰ阳性细胞数无明显差异（见图２Ｂ）。??１７??

促进ＥＲＫ磷酸化水平的表达，在ＲＡＮＫＬ刺激ＲＡＷ２６４．７细胞５分钟和１５分钟，Ｓｅｍａ??５Ａ?（５ｕｇ／ｍｌ）显著促进ｐ－ＥＲＫ的表达水平，而ＪＮＫ和Ｐ３８的磷酸化水平在前后没有??显著性变化（图４）。??ＲＡＮＫＬ?ｆｌＯＯｎ＾ｍＬ）???０?ｍｉｎ?５ｍｉｎ?１０ｍｍ?１５?ｍｉｎ??ＳｅｍａＳＡ?￣?＾?－?＋?－?＋?－?＋?５＿ｎＬ??ｉｉｉｊｊｉｉｌｔｉＰ＇ｉｉ?ｉｐｗａｗｉｉ?ｍｍｍ??ｐ－ｐｌ?Ｓ??吻綱＿＾?ｍｍｍｍ?＾ｍｒｎｔｓｍ?ｍｍｒｎｒｎ：?ｍｍｍ?．丨?ｍｍｍｍ?Ｔ－ＦＴ?Ｐ??■?ＪＬ?＊＂＂＊?ｊ＿ｉ?Ｘ?＼＿Ｘｘ．??ｐ－ＥＲＫ??）Ｔ＾ＪＮＫ??ｐ－ＪＮＫ??ｆｔ?ａ＾ｔｉｎ????????．＂丨?釋■啡導〇￣ｃｉ?ｗＬｌ－ｌ??图４?Ｓｅｍａ?５Ａ在ＲＡＷ２６４．７细胞中对ＭＡＰＫ途径的影响

【参考文献】：
期刊论文
[1]Sema3A在系统性红斑狼疮患者血清及单个核细胞中的表达[J]. 高辉,马晓旭,郭倩,邹雅丹,钟昱超,谢琳峰,邵苗,张学武.  中华医学杂志. 2017 (05)
[2]Semaphorin 3A在肿瘤中的研究进展[J]. 朱零,宋晓萌.  口腔医学. 2016(01)
[3]RANK RANKL和骨保护素在类风湿关节炎患者外周血和滑液中表达的研究[J]. 尚鹏,朱平,樊春梅,王彦宏.  中华风湿病学杂志. 2005(07)



本文编号：3329876