叶酸代谢相关基因甲基化在叶酸治疗HHcy效果中的作用

发布时间：2021-09-02 02:49

　　叶酸补充是高同型半胱氨酸血症（HHcy）的一线治疗方法。但是有高达40%的HHcy患者不能从叶酸补充治疗中获益。叶酸代谢是一个涉及多种酶的复杂代谢网络,不仅可以直接影响同型半胱氨酸（Hcy）的代谢,而且与DNA甲基化密切相关。DNA甲基化作为一种常见的表观遗传修饰,可以弥补遗传因素影响解释不足的情况。虽有研究结果提示叶酸代谢相关甜菜碱同型半胱氨酸甲基转移酶（Betaine-homocysteine methyltransferase,BHMT）和 5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（Methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR）基因甲基化与 Hcy 浓度的变化相关,但DNA甲基化对叶酸治疗HHcy效果的影响目前仍不清楚,有必要进一步探究DNA甲基化在叶酸治疗效果中的作用。目的结合影响叶酸治疗效果的环境及遗传因素,分析叶酸代谢相关基因BHMT和MTHFR甲基化水平对叶酸治疗效果的影响,进一步探讨DNA甲基化在叶酸治疗效果中的作用。方法本研究选择2014年07月-12月期间,在河南省郑州市郑州大学第五附属医院神经内科就诊的HHcy患者（Hcy浓度≥15μm... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．１?一碳转运过程??１．３?ＤＮＡ

??）！?基因组ＤＮＡ提取??＋?｜?＾?Ｉ?｝?Ｉ??ｒ?士?士??中期ｆ室检?１?ｆ基因多态性检测?ｆ＾甲基狀平检测＇??＾１?，?Ｔ＇?１?）??３?收集和整理数据??ｖ?＾??”?—?１?１?士?＾????［甲基化水平比较］［环境、遗传影响因索］ｒ构建中介模型ｊ??后期统计学分＾?＾?—｝＇〉?各〈〉各?〈??‘析?，独立关联模型）’交互作用模型），中介效应模型）??ｖ？＿??—?一???—?—?ｙ??图２．１技术路线图??２．?２．?６实验室检查??使用北京奥普森公司提供的试剂以及贝克曼全自动生化检测仪，采用免疫比??浊法以及酶法分别对血脂谱指标和血糖进行测定。采用双抗体夹心法测定人血清??中维生素Ｂ６?（ＶＢ６）、Ｂ１２?（ＶＢ１２）和叶酸水平，酶联免疫分析（ＥＬＩＳＡ）试剂??盒由北京麦格泰克科技有限公司提供。??２．?２．?７?ＤＮＡ的提取和纯度测定??使用北京百泰克生物技术有限公司的全基因组ＤＮＡ提取试剂，按照基因组??ＤＮＡ提取的相关步骤进行操作。主要步骤如下：??７??

?材料与方法???表２．１两个ＳＮＰｓ位点的信息??基因?ＳＮＰ＿ＩＤ?染色体?位置?等位基因?ＭＡＦ?值?ＨＷＥ－尸值??ＢＨＭＴ?ｒｓ３７３３８９０?５ｐｌ４．１?７９１２６１３６?Ｇ／Ａ?０．２９１?０．０４４?０．９２６??ＭＴＨＦＲ?ｒｓｌ８０１１３３?ｌｐ３６．３?１１７９６３２１?Ｃ／Ｔ?０．２４５?＜０．００１?０．１６８??２．２．９?ＤＮＡ甲基化检测??委托上海天昊遗传分析中心对ＢＨＭＴ和ＭＴＨＦＲ基因启动子区域的ＤＮＡ甲??基化水平进行检测。该分析中心采用基于多重ＰＣＲ高通量测序技术??ＭｅｔｈｙｌＴａｒｇｅｔＴＭ对目标区域甲基化进行检测，实验流程见图２．２。??引物设计及优化?Ｉ??＼?寸?、甲翻：位点区域富集??ＢＳＢ??文库构建??文库质检??上机测庠??图２．２甲基化实验流程图??９??


本文编号：3378154