地塞米松诱导大鼠肝脏糖脂代谢紊乱分子机制研究

发布时间：2021-09-04 07:20

　　糖脂代谢紊乱（Glucose metabolism disorders）是指机体内糖代谢相关激素和酶以及代谢器官发生病变,致使糖代谢紊乱;以及自身或环境因素造成的血液和相关代谢性器官脂质沉积或代谢异常的脂质代谢紊乱。而糖尿病、非酒精性脂肪肝、肥胖等疾病都与糖脂代谢紊乱密切相关,随着生活水平的提高,此类代谢疾病发生越来越普遍,但糖脂代谢紊乱的机制却有待完善。本文通过地塞米松作用不同时间诱导大鼠肝脏糖脂代谢紊乱模型,进一步揭示糖脂代谢紊乱的发病机制。将180-220g的雄性SD大鼠随机分为5组,即空白组（Ctrl）、地塞米松（DEX）不同作用之间 7d、14d、21d、28d 组（DEX07、DEX14、DEX21 和 DEX28）。地塞米松作用组分别给予lmg/kg地塞米松腹腔注射给药,作用不同的给药时间后,处死大鼠收集血清、肝脏组织和粪便样本用以后续实验。分别检测血清中ALT、AST、ALP、Glucose、FINS、TG、CHOL、LDL以及HDL的含量;HE染色观察肝脏组织病变和脂肪沉积情况;通过16srRNA高通量测序发分析大鼠粪便中肠道菌群的变化;利用转录组测序方法分析大鼠肝脏... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?１６ｓｒＲＮＡ测序流程??

?内蒙古农业大学硕士学位论文?９??着加入缓冲液、ｄＮＴＰｓ、ＲＮａｓｅＨ和ＤＮＡＰｏｌｙｍｅｒａｓｅ?Ｉ进行ｃＤＮＡ另一条链的合成，??然后使用ＱＩＡＱｕｉｃｋ?ＰＣＲ试剂盒进行ＤＮＡ纯化并加入ＥＢ缓冲液进行洗脱。得到的??双链ｃＤＮＡ接着末端修复、加碱基Ａ、加测序接头处理，处理之后利用琼脂糖凝胶??电泳将目的大小的片段进行回收，并且进行ＰＣＲ扩增，从而完成整个文库制备工??作。??文库构建完成后，先使用Ｑｕｂｉｔ３．０进行初步定量，稀释文库至ｌｎｇ／ｕｌ，随后使??用Ａｇｉｌｅｎｔ?２１００对文库的ｉｎｓｅｒｔ?ｓｉｚｅ进行检测，ｉｎｓｅｒｔ?ｓｉｚｅ符合预期后，使用Ｂｉｏ－ＲＡＤ??ＣＦＸ?９６荧光定量ＰＣＲ仪，Ｂｉｏ－ＲＡＤ?ＫＩＴ?ｉＱ?ＳＹＢＲ?ＧＲＮ进行Ｑ－ＰＣＲ，对文库的有??效浓度进行准确定量（文库有效浓度＞１０ｎＭ），以保证文库质量。利用Ｉｌｌｕｍｉｎａ平??台对质量合格的文库进行测序。测序策略为ＰＥ１５０。之后进行数据处理，如差异比??较、蛋白互作网络、ＧＯ富集分析和ＫＥＧＧ通路分析等。??总ＲＮＡ??臀??利用?Ｏｌｉｇｏ?（ＤＴ）??富集ｍＲＮＡ??▼??片段化??齡Ｔ▲二??随机引物反转录??末端修复，加Ａ??加接头??上机测序??图２转录组测序流程??Ｆｉｇ．２?Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｐｒｏｃｅｓｓ??技术路线：??

１２?地塞米松诱导肝脏糖脂代谢紊乱分子机制的研究???面积的坏死灶；ＤＥＸ２１组肝脏细胞大面积中度至严重的水泡变性和脂肪变性，并且??出现多个大面积坏死灶；而ＤＥＸ２８组肝脏细胞普遍出现中度至严重的颗粒变性、??水泡变性和脂肪变性，并没有发现坏死灶的出现。除此之外，对肝脏中的脂肪变性??情况进行病理统计，Ｃｔｒｌ组和ＤＥＸ０７组肝细胞内胞浆内未发现明显可见脂滴；??ＤＥＸ１４组中发生脂肪变性的肝细胞多数肝细胞胞浆内脂滴面积占肝细胞细胞浆面??积的三分之一至二分之一之间；ＤＥＸ２１组发生脂肪变性的肝细胞多数肝细胞胞浆内??脂滴面积占肝细胞细胞浆面积的三分之一以内；ＤＥＸ２８组发生脂肪变性的肝细胞多??数肝细胞胞浆内脂滴面积占肝细胞细胞浆面积的二分之一以上。从肝脏组织的病理??形态变化可以看出，ＤＥＸ作用２１ｄ时，肝脏受损最为严重，而ＤＥＸ作用２８ｄ时，??脂肪变性最为严重。??ｆｔ：：！??ｉｊｉｉ??图５地塞米松对肝脏组织病理形态的影响??Ｆｉｇ．５?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ?ｏｎ?ｌｉｖｅｒ?ｐａｔｈｏｌｏｇｙ??３．３?ＤＥＸ对糖脂代谢素乱大鼠血糖相关指标的影响??空腹血糖和空腹胰岛素异常是２型糖尿病前期胰岛素抵抗症状之一，而糖脂代??谢紊乱是糖尿病的病理基矗因此，对血清中的空腹血糖和空腹胰岛素进行检测。??如图６所示，在Ｇｌｕｃｏｓｅ的检测结果中可以看到，ＤＥＸ作用１４ｄ和２８ｄ后，与Ｃｔｒｌ??组相比，糖脂代谢紊乱大鼠的Ｇｌｕｃｏｓｅ浓度显著升高（Ｐ＜０．０５）。在ＦＩＮＳ的检测结果??

【参考文献】：
期刊论文
[1]蒙古黄芪多糖通过调控Nrf-2信号通路缓解地塞米松诱导的糖脂代谢紊乱[J]. 颜妍肖伟利,钟明月,黄建,李欣益,吴学梅,王玉珍.  中国免疫学杂志. 2020(03)
[2]Regulation of glucose and lipid metabolism in health and disease[J]. Ligong Chen,Xiao-Wei Chen,Xun Huang,Bao-Liang Song,Yan Wang,Yiguo Wang.  Science China（Life Sciences）. 2019(11)
[3]糖脂代谢紊乱机制研究及中医药防治的进展[J]. 王新苗,张海宇,魏秀秀,吴浩然,田佳星.  辽宁中医杂志. 2020(02)
[4]黄芪多糖对肥胖小鼠的减肥作用与调节肠道菌群的关系研究[J]. 何旭云,贺姣姣,郑宁宁,王顺春,李后开.  世界中医药. 2016(11)
[5]母鼠和断乳后高脂饮食诱导子代雄鼠出现糖脂代谢异常及肠道菌群失调的实验观察[J]. 郑佳,肖新华,张茜,于淼,许建萍,王志新,齐翠娟,王彤.  中国糖尿病杂志. 2015(11)
[6]Potential beneficial effects of butyrate in intestinal and extraintestinal diseases[J]. Roberto Berni Canani,Margherita Di Costanzo,Ludovica Leone,Monica Pedata,Rosaria Meli,Antonio Calignano.  World Journal of Gastroenterology. 2011(12)
[7]胰岛素抵抗与糖脂代谢[J]. 金成,赵瑛,张颖,罗兰,殷惠军.  中西医结合心脑血管病杂志. 2004(09)



本文编号：3382832