LC-MALD1-TOF/TOF MS方法鉴定分析类风湿关节炎患者滑膜液瓜氨酸化蛋白研究

发布时间：2021-09-30 00:03

　　背景类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是一种常见的、以关节组织炎症、损伤以及滑膜血管翳形成为特征的自身免疫性疾病,最终可导致关节畸形和机体各系统并发症。尽管RA的发病机制尚不完全清楚,但研究证明某些主要组织相容性复合体（MHC）亚型以及抗瓜氨酸化蛋白抗体（anti-citrullinated protein antibodies, ACPAs）与RA自身免疫性病理损伤的发生发展相关。ACPAs在RA患者血清中具有相对特异性,甚至在RA的临床前期也可以被检测到。另外,ACPAs在炎性滑膜中和瓜氨酸化的自身抗原相结合形成免疫复合物（immune complexes, ICs）,促进炎症的发生与发展。因此,准确鉴定分析RA患者滑膜液中的瓜氨酸化抗原并探讨其致病作用将对深入研究RA的发病机制具有重要意义。蛋白质瓜氨酸化是一种由肽酰基精氨酸脱亚胺酶（peptidylarginine deiminases, PADIs）催化的精氨酸残基向非编码瓜氨酸残基转变的翻译后修饰（post-translational modification, PTM）过程,该过程导致了一个正... 

【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
    参考文献
第一部分 液相色谱联合基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱对RA患者滑膜液瓜氨酸化肽的鉴定分析
    1. 实验材料
        1.1 标本来源
        1.2 排除标准
        1.3 实验试剂
        1.4 实验仪器
    2. 实验方法
        2.1 滑膜液白蛋白和IgG去除
        2.2 免疫沉淀
        2.3 BCA蛋白定量
        2.4 Western blotting
        2.5 瓜氨酸化蛋白的降解、烷化及酶解
        2.6 nano2D-HPLC
        2.7 MALDI-TOF/TOF MS分析
        2.8 生物信息学分析
    3. 实验结果
        3.1 免疫沉淀结果
        3.2 质谱鉴定结果
        3.4 生物信息学分析
    4. 讨论
    5. 小结
    参考文献
第二部分 瓜氨酸化抗原的验证
    1. 实验材料
        1.1 标本来源
        1.2 排除标准
        1.3 实验试剂
        1.4 实验仪器
    2. 实验方法
        2.1 SFs白蛋白和IgG去除
        2.2 BCA蛋白定量
        2.3 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
        2.4 考马斯亮蓝染色
        2.5 MALDI-TOF/TOF MS分析
        2.6 Western blotting
    3. 实验结果
        3.1 考马斯亮蓝染色结果
        3.2 Western blotting结果(一抗为兔抗人瓜氨酸化蛋白抗体)
        3.3 质谱分析结果
        3.4 Western blotting结果(一抗为兔抗LRG1抗体、兔抗macroH2A.1抗体、兔抗KNG抗体)
    4. 讨论
    5. 小结
    参考文献
全文总结
综述
    参考文献
附录A 缩略词表
附录B 攻读硕士学位期间发表论文
致谢



本文编号：3414715