2型糖尿病微环境影响下Clock对骨髓间充质干细胞成骨分化的调控机制研究

发布时间：2021-11-29 01:36

　　目的:2型糖尿病作为一种常见的慢性代谢疾病,增加骨折风险,干扰骨组织愈合,尤其影响骨形成代谢活动。骨髓间充质干细胞是成骨代谢过程中的重要细胞,在骨再生医学组织工程中可作为种子细胞,具有一定应用前景。先前的研究已证实节律基因与2型糖尿病互相影响,且节律基因参与细胞广泛的生理活动调控。因此,本实验研究通过建立2型糖尿病大鼠模型,探究其骨髓间充质干细胞的成骨分化能力和节律基因表达变化,并探究2型糖尿病微环境中节律基因Clock影响骨髓间充质干细胞成骨分化的调控机制,为防治2型糖尿病引起的骨损伤提供依据。方法:（1）利用GK大鼠,建立并筛选2型糖尿病大鼠模型,以Wistar大鼠作为对照组。分离下颌骨并提取骨髓间充质干细胞,体外纯化、培养糖尿病组和对照组的骨髓间充质干细胞,并应用Micro-CT进行两组下颌骨骨形态计量的扫描分析。（2）通过克隆形成实验、流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡实验、CCK-8实验评价两组细胞的增殖与凋亡活性。两组细胞在成骨诱导7天后进行碱性磷酸酶染色,在成骨诱导21天后进行茜素红染色。利用qRT-PCR、Western blot检测两组细胞成骨诱导前后的节律基因Cloc... 

【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?大鼠生化指标检测??（注：ａ：６－１４周龄体重值；ｂ：?１４周龄空腹血糖值；ｃ：?１４周龄空腹胰岛素值；ｄ：?１４??周龄０ＧＴＴ试验血糖值；＊：Ｐ＜０．０５）??

ＧＫ糖尿病组与Ｗｉｓｔａｒ对照组ＢＭＳＣｓ接种至含有完全培养液的培养皿后，２４ｈ??后倒置显微镜下观察到ＢＭＳＣｓ贴壁生长。糖尿病组细胞与对照组细胞贴壁后都呈长??梭形、条形、三角形或扁平形态（图２），生长较缓慢。可以发现，两组细胞在镜下??的贴壁表现无明显差别。??图２?倒置显微镜下ＢＭＳＣｓ形态??（注：倒置显微镜１０Ｘ，左：Ｗｉｓｔａｒ对照组ＢＭＳＣｓ；右：ＧＫ糖尿病组ＢＭＳＣｓ）??１７??

ｓａｒＰ＜０．０５。总的趋势上看，ＧＫ糖尿病组ＢＭＳＣｓ的生长曲线较平缓。??流式细胞仪检测ＢＭＳＣｓ的细胞周期与细胞凋亡实验结果可见，一方面，与对组Ｗｉｓｔａｒ?ＢＭＳＣｓ流式细胞周期结果比较，ＧＫ组ＢＭＳＣｓ在２型糖尿病微环境中Ｇ１期细胞百分数显著高于Ｗｉｓｔａｒ组，Ｐ＜０．０５；而Ｓ期细胞百分数，Ｇ２期细胞百数，都显著低于对照组，ＰＣ０．０５。细胞周期表明２型糖尿病微环境对ＧＫ组ＢＭＳ具有Ｇ１期阻滞作用（图５、表３）。另一方面，应用流式细胞仪检测两组ＢＭＳＣｓ胞凋亡，两组ＢＭＳＣｓ均只有少量细胞凋亡，ＧＫ组ＢＭＳＣｓ早期凋亡率和晚期凋显著比Ｗｉｓｔａｒ对照组高（图６、表４）?〇??综合以上克隆形成实验、ＣＣＫ－８实验以及流式细胞检测ＢＭＳＣｓ细胞周期与凋亡实验的实验结果，都趋向一致的表明，２型糖尿病微环境的影响表现为促ＢＭＳＣｓ凋亡活性，而抑制ＢＭＳＣｓ增殖活性。??

【参考文献】：
期刊论文
[1]牵张成骨对山羊下颌骨成骨细胞增殖节律的影响[J]. 龙洁,田卫东,郑晓辉,李声伟.  华西口腔医学杂志. 2003(02)



本文编号：3525573