ISG20在类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞中的作用及其机制研究

发布时间：2022-01-26 13:32

　　目的1.研究干扰素刺激核酸外切酶基因20kDa（Interferon-stimulated exonuclease gene 20,ISG20）在类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞（Rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA FLS）中的生物学功能;2.研究ISG20在RA FLS中异常表达的调控机制;3.研究ISG20调控RA FLS生物学活性的分子机制。方法设计并合成靶向ISG20的小干扰（small interfering RNA,siRNA）,转染RA FLS细胞后沉默ISG20的表达,阴性对照组（negative siRNA,NC）,检测干扰效率并筛选出干扰效率最佳的siRNA序列,用于后续实验;构建过表达ISG20的重组腺病毒载体上调RA FLS中ISG20的表达,采用RT-qPCR和Western blot确认ISG20的表达;MTS法检测ISG20对RA FLS细胞增殖能力的影响;体外管腔形成实验检测RA FLS中ISG20表达水平对人脐静脉血管内皮细胞CRL-1730细胞血管形成能力的影响;流式细胞术检测ISG... 

【文章来源】：济南大学山东省

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

细胞共培养体系示意图

36Figure 4.2 The number of key pathways related gene in siISG20 compared with NC. ( A) Down-regulatedsignaling pathways and the number of related genes. ( B) Up-regulated signaling pathways and the numberof related genes.图 4.2 siISG20 与 NC 相比各关键通路功能相关基因变化。（A）下调的信号通路和基因数量。（B）上调的信号通路和基因数量。由上图我们可以发现 ISG20 在 RA FLS 中影响的通路较多，结合 RA 发病机制和ISG20 的特点，我们筛选整理可能与 RA 有关的通路（如图 4.3）。

Figure 4.3 The number of key signal pathway genes in siISG20 compared with NC. P<0.0图 4.3 siISG20 与 NC 相比关键信号通路基因数量变化。P <0.054.1.4 ISG20 对关键信号通路和 mRNA 的调控由于转录组数据量较大，我们只对其中与 RA 密切相关的关键通路进行了ISG20 的抗病毒活性是当前研究中最重要的功能机制，也因此获得我们的关注[32我们的筛选策略是：1.在转录组测序结果中，沉默 ISG20 与 NC 相比该基因升高。2.该基因属于病毒相关的信号通路。3.该基因在相关文献中报道具有抑制用。综合上述三点，我们共筛选出 PTEN 和 PPARα 两个潜在基因[46,47]。基因转录组测序结果基因名称 芯片相关通路 变化倍数PTEN PI3K-Akt signaling pathway 3.56PPARα Hepatitis C 3.08

【参考文献】：
期刊论文
[1]巨噬细胞及其表达和分泌产物在类风湿性关节炎发病中的作用[J]. 奚正德,葛海良.  自然杂志. 2009(05)
[2]滑膜成纤维细胞在类风湿性关节炎中的作用[J]. 侯亚楠,郭礼和.  细胞生物学杂志. 2009(02)
[3]关节炎性骨侵蚀和骨保护蛋白的作用[J]. 奚正德,张冬青.  自然杂志. 2004(06)
[4]人基因工程干扰素γ治疗类风湿关节炎的Ⅲ期临床评价[J]. 唐福林,汪国生,李明佳,董怡.  中国新药杂志. 1998(06)
[5]滑膜成纤维细胞在类风湿关节炎中的作用[J]. 王燎原,戴生明.  中华风湿病学杂志. 2009 (06)

博士论文
[1]干扰素诱导基因IFIT家族分子促进Ⅰ型干扰素抗肿瘤作用及其机制研究[D]. 杨莹韵.北京协和医学院 2013



本文编号：3610578