高密度脂蛋白质组学技术方法建立及在二型糖尿病和冠状动脉疾病研究中的应用

发布时间：2017-05-13 12:07

  本文关键词：高密度脂蛋白质组学技术方法建立及在二型糖尿病和冠状动脉疾病研究中的应用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：脂蛋白是血液中一类由蛋白质、胆固醇和甘油三酯组成的球状微粒,按照密度由高到低可以分为：高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、中间密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和乳糜微粒,对于细胞外脂质的包装、储存、运输和代谢起着重要作用,脂蛋白代谢异常与动脉硬化症、二型糖尿病、肥胖症以及肿瘤发生密切相关。高密度脂蛋白在所有脂蛋白中直径最小、密度最大,且高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)在临床研究中常被称为“好胆固醇”,与心血管疾病风险呈负相关。近年有研究表明,高密度脂蛋白功能的丧失或转变为促炎症高密度脂蛋白与二型糖尿病和冠状动脉疾病发生与发展有着密切联系。为进一步研究高密度脂蛋白功能的改变,本研究首先对血浆中的高密度脂蛋白的分离和纯化进行方法学研究,通过颗粒直径和均一度两个指标对高密度脂蛋白的纯度进行验证,并获得纯度较高的高密度脂蛋白,并将该方法应用于二型糖尿病与冠状动脉疾病高密度脂蛋白质组学研究。本研究选取健康对照组、二型糖尿病组、冠状动脉疾病组和二型糖尿病合并冠状动脉疾病组四类人群,通过高密度脂蛋白的分离和纯化,以及基于液相色谱串联质谱和非标定量的蛋白质组学方法,对这四类人群的高密度脂蛋白质组进行定量比较,共鉴定到105种蛋白质,其中72种蛋白质在四组实验中均被鉴定到,33种蛋白质在各实验组间存在高表达或低表达。通过蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质功能注释和功能富集等相关的生物信息学技术及相关统计学方法,这些高表达或低表达蛋白质主要具有血管收缩、内皮细胞损伤、血栓形成和炎症响应等生物学功能,且存在8种不同的表达模式。这些结果对寻找高密度脂蛋白功能丧失和促炎症性发生和发展过程中的关键蛋白质,及对二型糖尿病和冠状动脉疾病的预防、诊断和治疗具有重要的意义。
【关键词】：高密度脂蛋白 分离 纯化 蛋白质组学 二型糖尿病 冠状动脉疾病
【学位授予单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.1;R543.3
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 1 绪论9-21
• 1.1 引言9
• 1.2 脂蛋白的分类与功能9-12
• 1.2.1 脂蛋白的分类9-10
• 1.2.2 脂蛋白的功能10-12
• 1.3 脂蛋白质组学研究方法12-15
• 1.3.1 脂蛋白的分离12-14
• 1.3.2 脂蛋白的鉴定14-15
• 1.4 脂蛋白质组学研究进展15-18
• 1.4.1 HDL脂蛋白质组及功能分析16-17
• 1.4.2 LDL和VLDL脂蛋白质组及功能分析17-18
• 1.5 脂蛋白质组学在二型糖尿病和冠状动脉疾病方面的研究进展18-19
• 1.5.1 脂蛋白质组学在冠状动脉疾病方面的研究进展18-19
• 1.5.2 脂蛋白质组学在二型糖尿病方面的研究进展19
• 1.6 研究的目的、意义和技术路线19-21
• 1.6.1 研究的目的和意义19
• 1.6.2 研究的技术路线19-21
• 2 材料与方法21-25
• 2.1 研究对象的选择21
• 2.2 高密度脂蛋白的分离21-22
• 2.2.1 血浆分离21
• 2.2.2 超速离心21
• 2.2.3 凝胶过滤色谱21-22
• 2.3 高密度脂蛋白的纯度和形态学检验22
• 2.3.1 动态光散射仪测量高密度脂蛋白直径22
• 2.3.2 透射电镜观察高密度脂蛋白形态22
• 2.4 蛋白质组学分析22-23
• 2.4.1 蛋白质样品制备22-23
• 2.4.2 液相色谱串联质谱鉴定23
• 2.5 统计分析和生物信息学分析23-25
• 2.5.1 高密度脂蛋白中蛋白质的鉴定23
• 2.5.2 蛋白质定量分析23-24
• 2.5.3 生物信息学分析24-25
• 3 结果25-39
• 3.1 四组实验对象的年龄及理化特征比较25-26
• 3.2 高密度脂蛋白分离和纯化结果26-28
• 3.2.1 高密度脂蛋白分离结果26-27
• 3.2.2 高密度脂蛋白纯化结果27
• 3.2.3 高密度脂蛋白纯度验证27-28
• 3.3 高密度脂蛋白中载脂蛋白的鉴定和定量结果分析28-29
• 3.4 高密度脂蛋白质组学定量结果重复性分析29-30
• 3.5 高密度脂蛋白质在各实验组间的动态变化30-31
• 3.6 差异表达蛋白质分析31-34
• 3.7 高密度脂蛋白质在各实验组间动态变化及功能分析34-39
• 3.7.1 二型糖尿病组中差异表达蛋白质及其功能35
• 3.7.2 冠状动脉疾病组中差异表达蛋白质及其功能35-37
• 3.7.3 二型糖尿病合并冠状动脉疾病组中差异表达蛋白质及其功能37-39
• 4 讨论39-45
• 4.1 高密度脂蛋白分离与纯化39
• 4.2 高密度脂蛋白质表达图谱特征39-40
• 4.3 高密度脂蛋白质定量结果分析40-41
• 4.4 高密度脂蛋白在4个实验组中高表达或低表达模式分析41-45
• 结论45-47
• 参考文献47-51
• 附录51-54
• 攻读学位期间发表的学术论文54-55
• 致谢55-56

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本文编号：362488