FFA上调KLF7促进脂肪细胞炎症因子IL-6表达的作用及机制研究

发布时间：2022-12-18 03:38

　　目的肥胖状态下血液游离脂肪酸（Free Fatty Acids,FFA）水平升高,可促进白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）等炎症因子的表达及释放,具体分子机制尚不十分明确。本研究在体外培养脂肪细胞的基础上,探讨Krüppel样因子7（Krüppel-Like Factor 7,KLF7）在FFA促进炎症因子IL-6高表达过程中的作用,并尝试阐明可能的分子机制,为治疗肥胖、炎症和相关代谢疾病提供新的靶点。方法（1）不同浓度饱和脂肪酸棕榈酸（Palmitic Acid,PA）刺激体外培养的脂肪细胞,qRT-PCR及Western blot法检测KLF7及TLR4/NF-κB/IL-6炎症信号通路关键因子及人单核细胞趋化蛋白-1（Monocyte Chemoattractant Protein-1,MCP-1）、白细胞介素-1β（Interleukin 1β,IL-1β）等炎症因子的mRNA及蛋白表达水平;（2）运用细胞转染和RNA干扰技术,分别上、下调TLR4和KLF7在脂肪细胞内的表达,检测上述关键因子的mRNA及蛋白表达水平;（3）PA刺激脂肪细胞的同时,下调KLF... 

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩略词对照表
前言
实验材料
    1.1 细胞
    1.2 实验试剂及仪器
    1.3 引物序列
实验方法
    2.1 细胞培养及诱导方法
    2.2 棕榈酸溶液的配制
    2.3 质粒构建及转染
    2.4 细胞RNA提取
    2.5 CHIP实验DNA提取方法
    2.6 DNA和 RNA琼脂糖凝胶质检
    2.7 反转录
    2.8 实时定量PCR(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)
    2.9 PCR扩增体系与扩增程序
    2.10 细胞的蛋白提取
    2.11 Western Blot
    2.12 ELISA
    2.13 活化菌株
    2.14 质粒提取
    2.15 荧光素酶报告基因实验
    2.16 染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,CHIP)
    2.17 数据分析
结果
    3.1 小鼠成纤维细胞(3T3-L1)诱导分化为脂肪细胞
    3.2 高浓度PA刺激脂肪细胞,促进了TLR4、KLF7和IL-6 等下游炎症因子的表达
    3.3 TLR4 正向调控脂肪细胞KLF7和IL-6 的表达
    3.4 KLF7 正向调控脂肪细胞p65 磷酸化及IL-6 的表达
    3.5 高浓度PA通过上调脂肪细胞KLF7 表达,促进IL-6 的表达
    3.6 KLF7 可转录激活IL-6
    3.7 KLF7 不转录激活p65
    3.8 KLF7 转录激活IL-6 过程不依赖pp65
    3.9 KLF7 可靶向结合IL-6 DNA启动子区5'-1696~13863'bp以及5'-354~1043'bp
讨论
结论
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
作者简介
附件


【参考文献】：
期刊论文
[1]不同类型脂肪酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用及Toll样受体4表达的影响[J]. 宋志秀,喻晓,周蓓,吴云凤.  卫生研究. 2017(06)
[2]游离脂肪酸对3T3-L1细胞IL-6 mRNA及蛋白表达的影响[J]. 袁继红,朱意,付家忠.  江苏农业科学. 2013(02)



本文编号：3721258