PGE2通过EP4/cAMP/PKA信号通路调控成纤维样滑膜细胞OAT1的表达及CP-25的作用

发布时间：2023-04-16 22:59

　　有机阴离子转运蛋白(organic anion transporters,OATs)是由超过10种跨膜转运蛋白所组成,是溶质载体超家族中的重要一员,其代表转运蛋白有OAT1、OAT2和OAT3等。有机阴离子转运蛋白1(OAT1)在内源性与外源性的有机离子重吸收及排泄的过程中扮演十分重要的角色,介导许多药物(例如抗生素,非甾体抗炎药,利尿药和抗病毒药等)的代谢产物和跨膜转运。研究发现糖尿病大鼠模型、非酒精性脂肪肝模型、高尿酸血症模型中,OAT1在肾脏组织中表达显著降低,其中在肾小管上皮细胞胞膜表达下降,胞质表达明显增加。此外,在临床糖尿病肾病患者、急性肾损伤患者组织中也发现OAT1的表达水平较低,而病人尿液中OAT1的含量水平显著高于正常组。炎性介质前列腺素E2(prostaglandinE2,PGE2)可明显降低大鼠肾脏细胞中OAT1的表达,抑制其转运活性。而已知PGE2与PKA和PKC所介导的信号通路有关,并且其能否影响OAT1的表达,引起OAT1的内吞,以及如何影响尚不清楚。类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性、以炎性滑膜炎为主的系统性疾病,其病...

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

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1 前言
2 实验材料
    2.1 药物和试剂
    2.2 仪器和设备
    2.3 实验动物
    2.4 临床样本
3 实验方法
    3.1 大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型的建立
    3.2 动物分组及给药方法
    3.3 大鼠整体指标评价标准
    3.4 大鼠关节和脾脏组织病理评分标准
    3.5 免疫组化法检测CIA大鼠滑膜组织中OAT1的表达
        3.5.1 样本收集
        3.5.2 免疫组化法
    3.6 检测大鼠血清中PGE2的水平
    3.7 Western blot法检测OA与RA患者滑膜组织中OAT1的表达
        3.7.1 组织蛋白样品的提取与制备
        3.7.2 Western blot 法
    3.8 PGE2对正常大鼠FLS中OAT1胞膜表达的时间效应
        3.8.1 正常大鼠FLS的分离培养及PGE2的刺激
        3.8.2 滑膜细胞胞膜蛋白的提取
        3.8.3 Western blot法检测FLS中OAT1的胞膜表达
    3.9 CP-25对PGE2刺激的正常大鼠FLS中OAT1的胞膜和胞质表达的影响
        3.9.1 激光共聚焦法检测CP-25对PGE2刺激的正常大鼠FLS中OAT1的胞膜表达
        3.9.2 Western blot法检测CP-25对PGE2刺激的正常大鼠FLS中OAT1的胞质表达
    3.10 EP4拮抗剂对CP-25调控的PGE2诱导的正常大鼠FLS中OAT1的胞膜表达的影响
    3.11 siRNA EP4对正常大鼠FLS中OAT1表达影响
    3.12 PKA抑制剂对CP-25调控的PGE2诱导的正常大鼠FLS中OAT1的胞膜和胞质表达的影响
    3.13 细胞膜红色荧光探针定位OAT1的表达和分布及CP-25的作用
    3.14 数据分析
4 结果
    4.1 CP-25对CIA大鼠整体指标的影响
        4.1.1 CP-25对CIA大鼠体重、关节炎指数、足爪肿胀数和足爪肿胀度的影响
        4.1.2 CP-25对CIA大鼠关节组织病理学的影响
        4.1.3 CP-25对CIA大鼠脾脏组织病理学的影
    4.2 各组大鼠血清中PGE2的水平
    4.3 各组大鼠滑膜组织中OAT1的表达水平
    4.4 OA与RA患者滑膜组织中OAT1的表达水平
    4.5 PGE2对正常大鼠FLS中OAT1胞膜表达的影响
    4.6 CP-25对PGE2刺激的正常大鼠FLS中OAT1的胞膜和胞质表达的影响
    4.7 EP4拮抗剂对CP-25调控的PGE2诱导的正常大鼠FLS中OAT1的胞膜表达的影响
    4.8 siRNA EP4对正常大鼠FLS中OAT1表达影响
    4.9 PKA抑制剂对CP-25调控的PGE2诱导的正常大鼠FLS中OAT1的胞膜和胞质表达的影响
    4.10 CP-25对正常大鼠FLS中OAT1的表达和分布的影响
5 讨论
    5.1 CP-25对CIA大鼠滑膜组织中异常表达的OAT1的作用
    5.2 CP-25通过活化PGE2介导的信号通路影响OAT1在大鼠FLS中胞膜和胞质的表达
6 结论
7 参考文献
附录
致谢
综述: 炎症状态下的细胞中药物转运体研究进展
    参考文献



本文编号：3792055