血红素氧合酶-1在糖尿病周围神经病变的作用及相关机制研究

发布时间：2023-05-19 05:03

　　背景:糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)是糖尿病最常见的慢性并发症,是糖尿病足、骨折以及截肢的重要危险因素。DPN的发病机制十分复杂,包括代谢紊乱、微血管功能异常、免疫炎症反应等,其中周围神经细胞氧化应激及细胞凋亡为DPN的两大病理学特征性改变。虽然目前针对上述发病机制开发了多种对因治疗药物,但临床上治疗疗效并不理想。血红素加氧酶-l(heme oxygenase-1,HO-1)是血红素降解的限速酶,可将血红素转化为胆红素、一氧化碳和铁离子,具有抗氧化、抗炎、抗凋亡、信号转导、免疫调节等生物学效应,为近期神经系统损伤及保护研究的新型靶向分子。在中枢神经细胞中,HO-1可通过调节可溶性鸟苷酸环化酶水平、增加钙激活钾通道、调节微血管收缩节律、抑制细胞凋亡而保护中枢神经细胞。但HO-1在周围神经系统中的研究比较有限。HO-1及其代谢产物是否参与DPN发生发展,其具体机制如何,能否作为监测及治疗DPN的靶点,目前研究尚未清楚。方法:我们首先收集1800例2型糖尿病患者血清标本,根据神经传导速度检测结合临床症状体征诊断DPN,检测血清胆红素...

【文章页数】：147 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1. 糖尿病周围神经病变的概述及研究进展
        1.1 糖尿病周围神经病变的定义及流行病学
        1.2 糖尿病周围神经病变的分类
        1.3 糖尿病周围神经病变的临床表现
        1.4 糖尿病周围神经病变的诊断及分级
        1.5 糖尿病周围神经病变的预防
        1.6 糖尿病周围神经病变的治疗
    2. 糖尿病周围神经病变的发病机制
        2.1 代谢因素
        2.2 血管因素
        2.3 免疫/炎症因素
    3. 血红素氧合酶-1及其代谢产物的生理病理作用
        3.1 血红素氧合酶-1及其生理学作用
        3.2 血红素氧合酶-1代谢产物及其生理学作用
        3.3 血红素氧合酶-1与代谢疾病
        3.4 血红素氧合酶-1的潜在治疗作用
    4. 血红素氧合酶-1与糖尿病周围神经病变
        4.1 抗氧化作用
        4.2 抗炎作用
        4.3 抗凋亡作用
        4.4 促进自噬作用
    5. 参考文献
第二章 血红素氧合酶-1的代谢产物--胆红素为糖尿病周围神经病变的新型生物标志物
    1. 前言
    2. 实验方法
        2.1 研究对象
        2.2 周围神经损伤问卷调查
        2.3 周围神经功能查体
        2.4 神经电生理检查
        2.5 临床资料收集
        2.6 数据统计及分析
    3. 实验结果
        3.1 糖尿病周围神经病变患者血清胆红素水平较低
        3.2 胆红素低分位患者糖尿病周围神经病变发生率较高
        3.3 低水平血清胆红素是糖尿病周围神经病变发生的独立危险因素
        3.4 低水平胆红素组糖尿病患者1年后神经传导速度显著减慢
    4. 讨论
        4.1 胆红素:从代谢废物到生物活性物质的改变
        4.2 血清胆红素与糖尿病并发症
        4.3 血清胆红素与糖尿病周围神经病变
        4.4 胆红素影响周围神经病变的作用机制
    5. 本章小结
    6. 参考文献
第三章 血红素氧合酶-1在高糖引起的雪旺氏细胞细胞损伤中的作用及机制研究
    1. 前言
    2. 实验仪器和实验试剂
        2.1 实验仪器
        2.2 实验试剂
    3. 实验材料
        3.1 糖尿病周围神经病变患者PBMC收集
        3.2 实验动物
        3.3 细胞株
    4. 实验方法
        4.1 小鼠腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)
        4.2 小鼠腹腔胰岛素耐量试验(IPITT)
        4.3 小鼠周围神经感觉功能检测
        4.4 小鼠坐骨神经传导速度测定
        4.5 小鼠坐骨神经透射电镜扫描
        4.6 小鼠足掌表皮内神经纤维密度染色
        4.7 总RNA提取
        4.8 逆转录
        4.9 Q-PCR
        4.10 蛋白提取
        4.11 蛋白浓度测定
        4.12 Western Blot
        4.13 组织切片免疫荧光
        4.14 细胞增殖与细胞毒性检测
        4.15 细胞凋亡检测
        4.16 细胞ROS检测
        4.17 细胞ATP测定
        4.18 数据统计分析
    5. 实验结果与讨论
        5.1 糖尿病周围神经病变患者血清HO-1水平及其活性显著下降
        5.2 糖尿病周围神经病变小鼠存在坐骨神经HO-1显著下降及线粒体异常
        5.3 高糖状态引起雪旺氏细胞HO-1下调、线粒体功能紊乱以及凋亡增加
        5.4 HO-1调节雪旺氏细胞的线粒体功能及细胞凋亡
        5.5 激活HO-1改善高糖引起的雪旺氏细胞线粒体功能紊乱以及凋亡增加
        5.6 HO-1通过调节自噬通路影响雪旺氏细胞线粒体功能及凋亡
    6. 本章小结
    7. 参考文献
全文总结
攻读学位期间学术成果
致谢



本文编号：3819708