17β-雌二醇通过GPER/Akt/mTOR信号途径调节胰岛β细胞的葡萄糖代谢及胰岛素分泌

发布时间：2023-05-19 17:52

　　目的:2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)是由多种因素引起的代谢紊乱疾病,以血糖升高及多器官系统损害为主要表现,主要病理生理改变为胰岛β细胞功能下降及机体的胰岛素抵抗。随着人口老龄化的发展趋势,T2DM的发病率及病死率逐年上升,有研究表明,在绝经后的女性,患病率较绝经前显著增加。女性雌激素减少与2型糖尿病、腹型肥胖、胰岛素抵抗及相关疾病的发生发展密切相关,给予雌激素替代治疗后以上情况明显改善。雌激素是一种类固醇激素,人类及其他高等动物体内最重要的激素之一,具有广泛的生理功能。在生殖系统、心血管系统、神经系统以及免疫系统发挥着重要的作用。卵巢分泌是雌激素的主要来源,另有少量雌激素来自于肾上腺皮质分泌以及从周围组织中转化。最近有研究表明,卵巢血管的完整性是雌激素合成的关键因素之一,当血脂异常,糖尿病等动脉硬化的危险因素存在时,卵巢血管受损,雌激素的产生会过早终止。人体内的雌激素主要有占主导地位的17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)和含量较低的雌三醇。新近发现的雌激素膜受体为一种G蛋白偶联受体(G protein-coupled estrog...

【文章页数】：82 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :GPER在大鼠胰腺组织及INS-1细胞中的表达
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料与试剂
            2.1.1 动物
            2.1.2 细胞
            2.1.3 主要试剂
            2.1.4 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 构建2型糖尿病大鼠模型
            2.2.2 INS-1细胞体外培养
            2.2.3 免疫荧光双染共聚焦检测大鼠胰腺组织GPER的表达
            2.2.4 Western blot检测大鼠胰腺组织及INS-1细胞GPER的表达
            2.2.5 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 GPER在大鼠胰腺组织中的表达
        3.2 INS-1细胞GPER的表达
        3.3 G15干预后INS-1细胞GPER的表达
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :E2上调GPER对胰岛β细胞葡萄糖代谢及胰岛素分泌的影响
    6 前言
    7 材料与方法
        7.1 实验材料与试剂
            7.1.1 动物
            7.1.2 细胞
            7.1.3 主要试剂
            7.1.4 主要仪器
        7.2 实验方法
            7.2.1 构建2型糖尿病大鼠模型
            7.2.2 INS-1细胞体外培养
            7.2.3 免疫荧光双染共聚焦检测大鼠胰腺组织中GPER、GLUT2蛋白表达
            7.2.4 Western blot检测大鼠胰腺组织及INS-1细胞中GPER、GLUT2蛋白表达
            7.2.5 Real-time PCR检测大鼠胰腺组织及INS-1细胞中GLUT2 及GK mRNA的表达
            7.2.6 ELISA检测大鼠胰岛素分泌水平
            7.2.7 葡萄糖氧化酶试剂盒检测大鼠血糖水平
            7.2.8 INS-1细胞葡萄糖摄取率检测
            7.2.9 ELASA检测INS-1细胞GK活性
            7.2.10 统计学分析
    8 实验结果
        8.1 E2干预后大鼠胰腺组织中GPER与 GLUT2的蛋白表达
        8.2 E2干预后大鼠胰腺组织中GPER、GLUT2的蛋白表达
        8.3 E2干预后大鼠胰腺组织中GLUT2与GK mRNA的表达
        8.4 E2干预后大鼠OGTT及 IRT结果
        8.5 INS-1细胞NG组与HG组GPER、GLUT2的蛋白表达
        8.6 INS-1细胞NG组与HG组GLUT2、GK mRNA的表达
        8.7 INS-1细胞NG组与HG组葡萄糖摄取率、GK活性、胰岛素分泌的结果
    9 讨论
    10 结论
第三部分 :Akt/mTOR信号通路在E2调节胰岛β细胞葡萄糖代谢及胰岛素分泌中的作用
    11 前言
    12 实验材料与方法
        12.1 材料与试剂
            12.1.1 细胞
            12.1.2 主要试剂
            12.1.3 主要仪器
        12.2 实验方法
            12.2.1 INS-1体外细胞培养
            12.2.2 Wb检测INS-1细胞GPER、p-Akt/Akt、p-m TOR/m TOR、GLUT2的蛋白表达
            12.2.3 Real-time PCR检测INS-1 细胞GLUT2、GK m RNA的表达
            12.2.4 INS-1细胞葡萄糖摄取率检测
            12.2.5 ELISA检测INS-1细胞GK活性
            12.2.6 ELISA检测INS-1细胞胰岛素分泌水平
            12.2.7 统计学分析
    13 实验结果
        13.1 正常糖及高糖培养基中INS-1细胞的蛋白表达
        13.2 预处理后正常糖培养基中INS-1细胞的蛋白表达
        13.3 预处理后正常糖培养基中INS-1细胞的m RNA表达
        13.4 预处理后正常糖培养基中INS-1细胞的葡萄糖摄取率、GK活性及胰岛素分泌结果
        13.5 预处理后高糖培养基中INS-1细胞的蛋白表达
        13.6 预处理后高糖培养基中INS-1细胞的m RNA表达
        13.7 预处理后高糖培养基中INS-1细胞的葡萄糖摄取率、GK活性及胰岛素分泌结果
    14 讨论
    15 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介



本文编号：3819813