TLR7/MiR-15b信号轴调节狼疮B细胞CCND3表达的机制研究

发布时间：2023-05-19 23:07

　　系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus, SLE)是一种常见的典型自身免疫性疾病,以B细胞的过度活化、T细胞的异常激活为主要特征。B细胞异常活化和功能异常对于SLE的发病极为关键,但关于SLE B细胞异常病变的分子机制仍不清楚。近年来研究表明,TLR7在SLE发病进程中具有重要作用。我们实验室在寻找其发病机制过程中发现：外部因素如TLR7配体、IFN-α和BCR配体刺激参与SLE中的B细胞的异常病变。Cyclin D3 (CCND3)是细胞周期蛋白D家族的三个成员之一,最早发现它能够调控细胞G1到S期的转换,而最近研究表明,其在B细胞的增殖、发育以及分化过程中起到至关重要的作用。但是TLR7是否能够影响CCND3的表达,进而影响B细胞的功能,还未见报道。基于以上研究,我们推测TLR7能够影响B细胞CCND3的表达来调控B细胞的相关功能。本研究首先比较了活动期SLE与正常人B细胞中表达基因的差异；其次对基因芯片结果进行了生物信息学分析,发现CCND3在活动期SLE的B细胞中异常表达；研究还发现激活TLR7通路能够上调B细胞的CCND3表达,且下调miR-...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词表
前言
第一章 TLR7受体及其信号通路在SLE中的研究进展
    1.1 SLE的研究概况
    1.2 SLE与B细胞
    1.3 TLR7与SLE
    1.4 TLR7与B细胞
    1.5 TLR7的阻断剂对小鼠SLE模型的治疗
第二章 SLE活动期患者B细胞芯片差异表达基因的分析
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验对象
        2.2.2 主要实验试剂
        2.2.3 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 人外周血B细胞的分离纯化
        2.3.2 总RNA的提取和纯化
        2.3.3 cDNA的合成和纯化(用来进行芯片杂交)
        2.3.4 芯片杂交
        2.3.5 差异基因的生物信息学分析
        2.3.6 cDNA的合成
        2.3.7 小鼠脾脏B细胞的分离纯化
        2.3.8 细胞培养
        2.3.9 实时荧光定量PCR
    2.4 实验结果
        2.4.1 差异表达基因聚类分析
        2.4.2 基因芯片结果验证
        2.4.3 GO term和GO tree分析
        2.4.5 差异基因GO pathway分析
        2.4.6 差异表达基因间相互作用关系网络
        2.4.7 SLE患者和狼疮小鼠B细胞中CCND3的表达均升高
    2.5 讨论
第三章 TLR7通路调控B细胞CCND3的分子机制
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验对象
        3.2.2 实验试剂
        3.2.3 主要仪器设备
    3.3 实验方法
        3.3.1 小鼠脾脏B细胞的分离纯化与培养
        3.3.2 RNA的提取
        3.3.3 cDNA的合成
        3.3.4 实时定量PCR
        3.3.5 lipo2000脂质体转染实验
        3.3.6 western blot
        3.3.7 luciferase实验
        3.3.8 流式细胞术
        3.3.9 小鼠肾脏HE染色
    3.4 结果
        3.4.1 激活TLR7通路能够上调CCND3在B细胞中的表达
        3.4.2 激活TLR7通路能够下调miR-15b在B细胞中的表达
        3.4.3 MiR-15b在活动期SLE和狼疮小鼠B细胞中的表达量均降低
        3.4.4 MiR-15b能够直接靶向CCND3的3'-UTR
        3.4.5 咪喹莫特诱导的狼疮模型的构建
        3.4.6 CCND3在咪喹莫特诱导的狼疮模型B细胞中表达上调,而miR-15b在该模型B细胞中表达下调
    3.5 讨论
结论
参考文献
附录
硕士期间发表及待发表的论文
致谢



本文编号：3820057