IL-22对于糖尿病伴牙周炎牙周膜细胞成骨能力影响

发布时间：2023-10-06 11:03

　　目的:研究IL-22对于糖尿病伴牙周炎的牙周膜细胞成骨能力影响,并初步探究其机制方法:提取原代牙周膜细胞(Periodontal Ligament Cells,PDLC),加入牛血清蛋白(Bull Serum Albumin,BSA100μg/mL)、晚期糖基化终产物(Advanced Glycation End Products,AGEs 100μg/mL)、牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,PgLPS 1.25μg/mL)以及不同浓度IL-22(20ng/mL,40ng/mL)连续培养7天;MTT比色法检测PDLC增殖情况;Hoechst 33342、Caspase3活力检测试剂盒检测细胞凋亡情况;ELISA法检测PDLC细胞培养基中IL-6和TNF-α的分泌量;利用碱性磷酸酶进行染色和定量分析,测定抗酒石酸酸性酶活力和茜素红染色检测PDLC成骨能力;实时荧光定量PCR法检测相关基因表达;免疫印迹法检测相关蛋白表达。结果:1.AGEs和PgLPS处理后P38、pP38、Bax、PI3K、pAkt、Akt、R...

【文章页数】：95 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略词表
第一章 前言
    1.牙周炎
        1.1 牙周病
        1.2 牙周炎流行病学调查
        1.3 牙周病临床诊断标准
        1.4 牙周炎临床表征
        1.5 牙周炎的主要致病因素——口腔微生物
        1.6 牙周炎对于牙支持组织的影响
        1.7 牙周炎与全身疾病
        1.8 牙周炎治疗
    2.糖尿病对于牙周炎的影响
        2.1 糖尿病
        2.2 流行病学调查
        2.3 糖尿病加剧牙周炎程度的因素
            2.3.1 晚期糖基化终产物
            2.3.2 氧化应激
            2.3.3 炎症反应
        2.4 糖尿病对于牙周炎中牙槽骨吸收的影响
    3.IL-22 概述
        3.1 IL-22 基因
        3.2 IL-22 受体
        3.3 IL-22BP
        3.4 IL-22 来源
        3.5 IL-22 功能
    4.研究内容
    5.研究目的及意义
第二章 材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要实验仪器与设备
        2.1.2 主要实验试剂
        2.1.3 抗体
        2.1.4 引物
        2.1.5 主要实验用试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 牙周膜细胞原代培养
        2.2.2 牙周膜细胞的鉴定
        2.2.3 绘制细胞生长曲线
        2.2.4 牙周膜细胞的复苏
        2.2.5 牙周膜细胞的换液
        2.2.6 牙周膜细胞的传代
        2.2.7 牙周膜细胞的冻存
        2.2.8 细胞增殖与毒性实验(MTT法)
        2.2.9 IL-6 ELISA试剂盒标准曲线制备
        2.2.10 TNF-αELISA试剂盒标准曲线制备
        2.2.11 细胞凋亡Hoechst33342 染色
        2.2.12 牙周膜细胞蛋白提取
        2.2.13 牙周膜细胞蛋白BCA定量
        2.2.14 抗酒石酸酸性磷酸酶检测(StrACP)
        2.2.15 碱性磷酸酶定量检测
        2.2.16 碱性磷酸酶染色
        2.2.17 Caspase3 活性检测
        2.2.18 实时荧光定量PCR检测基因mRNA水平
        2.2.19 免疫印迹法检测IL-22 对于AGEs和 Pg LPS处理的牙周膜细胞增殖、凋亡等相关蛋白表达的影响
        2.2.20 数据的统计分析
    3.结果
        3.1 牙周膜细胞的体外分离培养
        3.2 牙周膜细胞原代鉴定
        3.3 牙周膜细胞生长曲线
        3.4 Pg LPS对于牙周膜细胞增殖、凋亡和炎性因子释放情况的影响
            3.4.1 Pg LPS对于牙周膜细胞增殖情况的影响
            3.4.2 Pg LPS对于牙周膜细胞凋亡情况的影响
            3.4.3 Pg LPS对于牙周膜细胞炎性因子释放情况的影响
        3.5 AGEs对于牙周膜细胞增殖、凋亡和炎性因子释放的影响
            3.5.1 AGEs对于牙周膜细胞增殖的影响
            3.5.2 AGEs对于牙周膜细胞凋亡情况的影响
            3.5.3 AGEs对于牙周膜细胞炎性因子释放情况的影响
        3.6 IL-22 对于牙周膜细胞增殖和凋亡情况的影响
            3.6.1 IL-22 对于牙周膜细胞增殖的影响
            3.6.2 IL-22 对于牙周膜细胞凋亡状况的影响
        3.7 不同浓度IL-22对PDLC成骨能力的检测
            3.7.1 碱性磷酸酶显色检测
            3.7.2 碱性磷酸酶定量检测
            3.7.3 抗酒石酸酸性酶活性检测(StrACP)
            3.7.4 茜素红染色
        3.8 不同浓度IL-22对PDLC Caspase3 活力的影响
        3.9 不同浓度IL-22对PDLC炎性因子释放的影响
        3.10 不同浓度IL-22 刺激的PDLC的IL-22 受体和成骨等相关基因的表达
        3.11 不同浓度IL-22 通过激活牙周膜细胞内调控成骨、增殖和凋亡相关蛋白的表达
讨论
结论
参考文献
在学期间的研究成果
致谢



本文编号：3851732