基于相对和绝对定量同位素标记技术对肥胖大鼠海马区差异蛋白组学的研究

发布时间：2023-11-02 18:00

　　目的筛选及鉴定肥胖大鼠海马区的差异蛋白表达。方法将24只SD大鼠随机分为单纯肥胖组(Ob,n=14)及正常对照组(NC,n=10)。予高脂高糖饮食制备单纯肥胖大鼠模型,采用相对和绝对定量同位素标记技术(iTRAQ)联合二维液相色谱-串联质谱(2D-LC-MS/MS)法鉴定肥胖大鼠海马区差异蛋白表达,对所获蛋白行生物信息学分析,Western blot法对筛选的部分差异蛋白进行验证。结果成功建立单纯肥胖大鼠模型,共鉴定出310种差异蛋白表达。于KEGG数据库检索筛选出26个差异蛋白显著富集的代谢通路。选取位于蛋白功能相互作用网络交叉点的4种差异蛋白行Western blot验证,发现蛋白表达水平与质谱结果一致。结论采用iTRAQ结合2D-LC-MS/MS技术,能有效筛选肥胖大鼠海马区差异蛋白表达,为研究肥胖对中枢神经系统损伤机制提供依据。

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【文章目录】：
材料与方法
    一、实验材料
    二、实验方法
        1. 分组及模型建立：
        2. 样品制备：
        3. 蛋白提取及定量：
        4. iTRAQ试剂标记及检测：
        5. SCX分离：
        6. 基于Triple TOF 5600的LC-MS/MS分析：
        7. 生物信息学分析：
        8. Western blot验证筛选的蛋白表达水平：
    三、统计学处理
结果
    一、蛋白鉴定及筛选的差异蛋白
    二、pathway代谢通路注释
    三、蛋白相互作用网络分析
    四、各组差异蛋白的Western blot验证
讨论



本文编号：3859482