双亚型支气管哮喘多组学机制及联合大株红景天治疗的研究

发布时间：2023-11-30 20:27

　　哮喘疾病的异质性因其涉及诸多自身免疫成分、外界环境因素及表观遗传调控等复杂的机制而始终困扰着临床治疗方法的决策并且造成相当的致死率。本论文的系列研究围绕哮喘双亚型的发病机制以及传统中药大株红景天改善哮喘的潜在多组学药理学机制开展。本系列研究首先通过采集哮喘双亚型患者(嗜酸性粒细胞性哮喘亚型,EA与非嗜酸性粒细胞性哮喘亚型,NEA)临床样本,利用高通量二代测序微生物组学技术以及高分辨的代谢组学技术进行了多组学分析。通过复制哮喘双亚型动物模型开展深入的哮喘亚型发病机制研究,并且进行大株红景天单独或联合地塞米松治疗的免疫学及多组学药理学机制探索。同时初步开展了大株红景天注射液的含量测定法考察及其正丁醇提取物的潜在指纹图谱研究。取得了诸多创新研究成果,现简述如下:1.通过研究双亚型哮喘患者诱导痰中微生物菌群,我们发现哮喘患者气道中菌群的多样性、丰富度及均匀度显著下降,其中NEA亚型尤为明显。进一步研究发现,双亚型哮喘之间及其与健康人之间的下呼吸道微生物菌群组成存在显著的差别。有5个菌属被发现与肺功能和疾病进程紧密相关。另外,菌群网络关联分析表明,与其他菌属潜在相关的病原体(如嗜血杆菌属等)在不...

【文章页数】：259 页

【学位级别】：硕士

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前言
摘要
ABSTRACT
主要英文缩略词表
第1章 引言·文献综述
    1.1 哮喘研究进展
        1.1.1 哮喘的免疫学机制
        1.1.2 哮喘表型研究进展
        1.1.3 中性粒细胞性哮喘
        1.1.4 调节性T细胞
    1.2 微生物组学研究进展
        1.2.1 微生物组学研究简介
        1.2.2 哮喘微生物组学研究进展
    1.3 代谢组学研究进展
        1.3.1 代谢组学研究简介
        1.3.2 哮喘代谢组学研究进展
    1.4 大株红景天研究进展
        1.4.1 哮喘常见治疗策略及预后
        1.4.2 大株红景天
        1.4.3 大株红景天改善哮喘的可行性分析
    1.5 本研究设计及思路
        1.5.1 本研究的研究目的与假设
        1.5.2 本研究设计及特色
        1.5.3 本研究拟解决的关键科学及技术问题
第2章 双亚型哮喘患者气道微生物组学差异研究
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 材料与试剂
        2.2.2 仪器与设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 患者招募及伦理评价
        2.3.2 样品处理及测序文库建立
        2.3.3 测序方法及流程
        2.3.4 数据处理及生物信息学分析
        2.3.5 统计学方法
    2.4 实验结果
        2.4.1 患者信息及统计
        2.4.2 α多样性分析
        2.4.3 β多样性分析及判别分析
        2.4.4 差异性菌属鉴定
        2.4.5 菌属相互作用网络分析
        2.4.6 PICRUSt功能预测
    2.5 讨论
    2.6 结论
第3章 双亚型哮喘患者代谢组学差异研究
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 材料与试剂
        3.2.2 仪器与设备
    3.3 实验方法
        3.3.1 患者招募及伦理评价
        3.3.2 样品制备方法
        3.3.3 UPLC-QTOF-MS检测条件及质控方法
        3.3.4 数据处理及生物信息学分析
        3.3.5 统计学方法
    3.4 实验结果
        3.4.1 患者信息及统计
        3.4.2 QC质控及质谱稳定性
        3.4.3 多元协变量模型及分析
        3.4.4 差异性代谢产物鉴定
        3.4.5 相关代谢通路鉴定
    3.5 讨论
    3.6 结论
第4章 大株红景天注射液质量标准验证及改善哮喘的免疫学机制研究
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 材料与试剂
        4.2.2 仪器与设备
    4.3 实验方法
        4.3.1 色谱条件及样品制备
        4.3.2 稳定性试验
        4.3.3 重复性试验
        4.3.4 中间精密度试验
        4.3.5 线性考察
        4.3.6 准确度回收率试验
        4.3.7 含量测定及色谱指纹图谱的初探
        4.3.8 实验动物及伦理学评价
        4.3.9 双亚型哮喘动物模型的复制及给药方案
        4.3.10 肺功能及气道高反应性检测
        4.3.11 炎症状态评价
        4.3.12 免疫平衡状态评价
    4.4 实验结果
        4.4.1 稳定性评价结果
        4.4.2 重复性评价结果
        4.4.3 中间精密度评价结果
        4.4.4 线性评价结果
        4.4.5 回收率评价结果
        4.4.6 含量测定及指纹图谱初探结果
        4.4.7 肺功能及气道高反应性结果
        4.4.8 气道H&E染色结果
        4.4.9 辅助性T淋巴细胞群失衡及调节
        4.4.10 调节性T淋巴细胞群失衡及调节
        4.4.11 炎症介质定量结果
    4.5 讨论
    4.6 结论
第5章 地塞米松联合大株红景天改善哮喘的组学机制研究
    5.1 引言
    5.2 实验材料
        5.2.1 材料与试剂
        5.2.2 仪器与设备
    5.3 实验方法
        5.3.1 微生物组学研究
        5.3.2 代谢组学研究
    5.4 实验结果
        5.4.1 测序质量及统计
        5.4.2 α多样性及β多样性分析
        5.4.3 判别分析及差异性种属鉴定
        5.4.4 PICRUSt功能预测
        5.4.5 代谢组学多元协变量模型及分析
        5.4.6 差异性代谢产物鉴定
        5.4.7 相关代谢通路及网络药理学挖掘
    5.5 讨论
    5.6 结论
第6章 多组学关联分析初探
    6.1 引言
    6.2 实验数据
        6.2.1 微生物组学数据
        6.2.2 代谢组学数据
    6.3 研究方法
        6.3.1 方法学概述
        6.3.2 数据处理
        6.3.3 网络关联
        6.3.4 数据导出
    6.4 实验结果
        6.4.1 临床患者样本多组学关联
        6.4.2 实验动物疾病模型组多组学关联
        6.4.3 气道菌群及局部微环境代谢模式关联
        6.4.4 大株红景天网络药理学机制
    6.5 讨论
    6.6 结论
第7章 本研究局限性分析
第8章 结论
参考文献
附录
    附图
    附表
    附代码
作者简介及在学期间所取得的科研成果
    作者简介
    在学期间发表的学术论文
    在学期间承担科研项目
    在学期间获得的奖励
    在学期间参加的学术会议及国际交流
致谢



本文编号：3869177