ASIC1a通过调控Ca 2+ /NFATc3/RANTES信号通路诱导滑膜炎症

发布时间：2024-03-10 03:53

　　类风湿关节炎(RA,rheumatoid arthritis)是最常见且严重的自身免疫性疾病之一,可导致患者丧失生活自理能力乃至残疾。迄今为止,类风湿关节炎的病因和发病机制仍未明确、阐明,且针对类风湿关节炎病因的研究在可期的时间内难以取得突破,致力于开发对因治疗药物或治疗方式的研究更是难以实施。因此,阻止病程发展是治疗类风湿关节炎的首要任务和最佳选择。滑膜炎症起始于疾病初期,贯穿整个病程,是驱使类风湿关节炎病程发展,导致患病关节功能丧失,致使患者残疾的主导因素之一,也是类风湿关节炎的主要且关键的病征。在类风湿关节炎的临床治疗中,控制炎症是首选且必要的策略,是阻止病程发展的关键。但是,滑膜炎症的发病机理及其分子机制仍未完全阐明,针对炎症反应过程开发的药物和治疗方式只能缓解滑膜炎症,并不能控制或阻止滑膜炎症的发生发展。这导致接受治疗的类风湿关节炎患者的病情仍在发展,且随着病程的延长,患病关节会丧失功能,患者最终丧失生活自理能力乃至残疾。所以,阐明滑膜炎症的发病机制是控制滑膜炎症发生发展以阻止类风湿关节炎病程发展的关键所在。酸敏感离子通道1a(acid sensing ion channel...

【文章页数】：155 页

【学位级别】：博士

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1. 前言
2. 实验材料
    2.1. 组织收集与保存
    2.2. 药品与试剂
    2.3. 耗材、仪器与设备
    2.4. 主要溶液的配制
3. 实验方法
    3.1. 人原代滑膜成纤维细胞的提取分离
    3.2. 人原代滑膜成纤维细胞的培养与传代
    3.3. 细胞冻存
    3.4. 细胞复苏
    3.5. 台盼蓝染色
    3.6. 细胞计数
    3.7.Western blotting 法检测细胞中目的蛋白的表达情况
    3.8. 流式细胞术检测细胞内钙离子浓度
    3.9.激光共聚焦显微镜检测细胞外 Ca²⁺内流或细胞内 Ca²⁺浓度
    3.10. 苏木精-伊红染色
    3.11. 免疫组化法
    3.12. 双荧光素酶报告基因实验
    3.13.染色质免疫共沉淀-实时荧光定量 PCR 实验(ChIP-qPCR)
    3.14.流式细胞术鉴定人原代滑膜成纤维细胞及检测目的蛋白表达
    3.15.免疫荧光法检测细胞内目的蛋白的表达和定位
    3.16.Luminex 液相芯片技术测定炎症因子 RANTES、sTNF RI、IL-8、sTNF RII、ICAM-1 表达量
    3.17.固相抗体芯片检测 40 个炎症因子表达量
    3.18.酶联免疫吸附法(ELISA)测定 MIP-1a 的表达量
    3.19. 体内实验
    3.20. 统计学分析
4. 结果
    4.1. ASIC1a在RA滑膜组织中高表达
    4.2. ASIC1a在RA滑膜成纤维细胞中高表达
    4.3. ASIC1a在RASF中具有介导细胞外Ca²⁺内流的离子通道活性
    4.4. ASIC1a通过介导细胞外Ca²⁺内流上调炎症因子的表达
    4.5. ASIC1a通过介导体内炎症因子的表达促进关节炎症
    4.6. ASIC1a通过介导细胞外Ca²⁺内流增强NFATc3核易位水平
    4.7. ASIC1a通过激活NFATc3调控RANTES基因转录
5. 讨论
6. 结论
参考文献
附录 个人简介
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3924203