狼疮鼠EMP在各脏器表达特征及EMP与抗核抗体形成关系研究

发布时间：2024-11-02 05:55

　　第一部分狼疮鼠EMP在各脏器表达特征目的:观察幼红细胞巨噬细胞连接蛋白(Erythroblast Macrophage Protein,EMP)在狼疮鼠组与对照鼠组各脏器的表达特点。方法:10只雌性MRL/lpr狼疮模型鼠,12周龄,体质量25.1～30.4(平均27.6)g,动物购自上海斯莱克实验动物中心。C57BL/6鼠12周龄,体质量25.1～30.4(平均27.6)g,动物购自南京实验动物中心.饲养于广东省实验动物中心,适应1周后,脱颈处死。先剥离小鼠四肢肌肉,取小鼠双侧肱骨及股骨,肱骨放于脱钙液中侵泡72小时后固定于石蜡做免疫组化检测,股骨剪去两端软骨露出红色的骨髓腔.冰上操作,运用1ml注射器吸取PBS液反复冲洗骨髓腔2-3遍,1000r/min,5min离心去上清,提取总RNA,进行EMP基因表达检测。同时取小鼠的肝脏、肾脏、肺脏、脾脏、脑组织,分成两份,一份放于甲醛中固定用于做EMP免疫组化及免疫荧光双标,一份放于液氮中冷藏用于做EMP基因表达检测。结果:荧光定量PCR检测显示:EMP在狼疮鼠组各组织均有表达,但在骨髓中表达最高。,EMP在肝脏(t=2.747,p=0.0...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1：四段EMP-siRNA基因沉默Nr8383巨噬基因沉默效率的检测结果，GACUCCGGAAGAUGAATT-3’片段作为E部分构建EMP体内基因沉默的转染载体。构建EMP干扰腺病毒转染骨髓巨噬质粒鉴定CR法获取基因片段琼脂糖凝....

放置于含5%CO2，37℃的细胞培养箱中培养。24h后荧光观察荧光表达（图4）。结果说明重组腺病毒转染293A细胞成功。293A转染24h荧光图片（X200）图4：EMP-shRNA腺病毒转染到啊293A细胞荧光图片染扩增：将携带EMP-shRNA腺病毒感....

好的EMP-shRNA腺病毒转染到狼疮小鼠的镜观察，显示绿色荧光表达（图6）。实MP表达量。EMP在转染后骨髓细胞较转学意义（P<0.05）（图7）。表明转染骨胞转染前骨髓巨噬细胞转染后骨髓巨噬细6：狼疮小鼠骨髓巨噬细胞转染前后图片（S-P×

细胞图1：基因沉默组小鼠及空载体腺病毒组狼疮小鼠骨髓巨噬细胞荧光图片（S-P×200）2.2实时荧光定量PCR检测EMP表达差异，结果显示（图2，表1）：1.基因沉默组小鼠骨髓巨噬细胞EMP表达明显较空白组小鼠骨髓巨噬细胞表达低，差异具有统计学意义（T=4.852,P=0.....

本文编号：4009138