饲喂ob基因重组酵母对小鼠瘦素的调节研究
发布时间：2025-03-17 23:22
随着肥胖患者的急剧增多,与之相关的2型糖尿病、动脉粥样硬化、心血管疾病以及癌症等疾病患者不断增加,这也使得肥胖成为覆盖全球的重大健康难题。研究表明,肥胖的产生与肥胖基因(ob)编码的瘦素蛋白(leptin)水平的失控有着密不可分的关系。瘦素的主要生理作用是控制食物摄入,增加机体能量消耗。鉴于此研究,开始探索利用瘦素治疗肥胖的可能性,然而瘦素抵抗现象的存在使得瘦素在临床治疗中并没有效果,只对少部分基因突变的缺乏瘦素的肥胖个体有效果。而新的研究也提供了新的方向:通过注射中性瘦素抗体能够与血液中的循环瘦素发生免疫反应,瘦素抗体与血液中的循环瘦素结合,中和抵消血液中的瘦素进而恢复瘦素的敏感性,使得正常肥胖患者体内的瘦素可以发挥正常的生理功能。酿酒酵母能够刺激树突状细胞(DCs)发生免疫反应,之后围绕着树突状细胞以及酵母互作开发的免疫疗法逐渐取得世人的关注。从最初的蛋白表达系统到表面展示系统,再到之后的DNA/m RNA/sh RNA等核酸系统,该系统的免疫效果逐步优化增强。本研究将ob基因与重组酵母系统相结合,开发一种针对瘦素调控的ob基因重组酵母,并利用活体实验验证了在不同饮食条件(高脂组、正...
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
第一章 文献综述
1.1 肥胖基因与瘦素
1.1.1 肥胖基因
1.1.2 瘦素
1.2 leptin与瘦素受体(Lep R)的基本结构和功能
1.2.1 leptin的基本结构
1.2.2 瘦素受体(LepR)的基本结构
1.2.3 leptin的功能
1.3 瘦素抵抗及选择性瘦素抵抗及其机制
1.3.1 瘦素抵抗及其机制
1.3.2 选择性瘦素及其抵抗机制
1.4 瘦素抵抗的治疗靶标
1.5 口服疫苗技术
1.5.1 口服疫苗技术原理
1.5.2 口服疫苗技术优缺点
1.6 酵母与免疫的研究
1.7 重组酿酒酵母介导的免疫
1.7.1 重组酵母介导的口服蛋白疫苗
1.7.2 重组酵母介导的口服DNA/RNA疫苗
1.8 本研究的目的和意义
第二章 ob基因重组酵母的构建
2.1 试验材料
2.1.1 菌株及质粒
2.1.2 试剂
2.1.3 培养基的配制
2.1.4 引物
2.1.5 试剂配方
2.2 试验方法
2.2.1 ob基因的扩增及JMB84-CMV-ob-poly A真核表达载体的构建
2.2.2 JMB84-CMV-OVA-ob-poly A真核表达载体的构建
2.2.3 JMB84-CMV-OVA-ob-T2A-GFP-poly A真核表达载体构建及细胞表达
2.2.4 ob基因重组酵母的鉴定及制备
2.2.5 原核表达载体的构建以及重组leptin蛋白的纯化
2.3 试验结果
2.3.1 ob基因的扩增及JMB84-CMV-ob-poly A真核表达载体的构建
2.3.2 JMB84-CMV-OVA-ob-poly A真核表达载体的构建
2.3.3 JMB84-CMV-OVA-ob-T2A-GFP-poly A真核表达载体构建及细胞表达
2.3.4 ob基因重组酵母的鉴定及制备
2.3.5 原核表达载体的构建以及重组leptin蛋白的纯化
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 ob基因重组酵母的活体验证
3.1 试验材料
3.1.1 重组酵母
3.1.2 实验动物
3.1.3 试剂
3.1.4 试剂的配制
3.2 试验方法
3.2.1 实验动物分组
3.2.2 动物的免疫程序
3.2.3 实验动物体重及采食量分析
3.2.4 实验动物血液以及组织样品采集
3.2.5 血液中leptin抗体鉴定以及抗体效价比较
3.2.6 血液中leptin含量测定
3.2.7 总胆固醇和甘油三酯的测定
3.2.8 肝脏组织学分析
3.3 试验结果
3.3.1 正常组饲喂ob基因重组酵母的验证
3.3.2 高脂组饲喂ob基因重组酵母的验证
3.3.3 高脂-正常组饲喂ob基因重组酵母的验证
3.4 讨论
3.5 小结
结论
参考文献
致谢
个人简历
本文编号：4035634
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
第一章 文献综述
1.1 肥胖基因与瘦素
1.1.1 肥胖基因
1.1.2 瘦素
1.2 leptin与瘦素受体(Lep R)的基本结构和功能
1.2.1 leptin的基本结构
1.2.2 瘦素受体(LepR)的基本结构
1.2.3 leptin的功能
1.3 瘦素抵抗及选择性瘦素抵抗及其机制
1.3.1 瘦素抵抗及其机制
1.3.2 选择性瘦素及其抵抗机制
1.4 瘦素抵抗的治疗靶标
1.5 口服疫苗技术
1.5.1 口服疫苗技术原理
1.5.2 口服疫苗技术优缺点
1.6 酵母与免疫的研究
1.7 重组酿酒酵母介导的免疫
1.7.1 重组酵母介导的口服蛋白疫苗
1.7.2 重组酵母介导的口服DNA/RNA疫苗
1.8 本研究的目的和意义
第二章 ob基因重组酵母的构建
2.1 试验材料
2.1.1 菌株及质粒
2.1.2 试剂
2.1.3 培养基的配制
2.1.4 引物
2.1.5 试剂配方
2.2 试验方法
2.2.1 ob基因的扩增及JMB84-CMV-ob-poly A真核表达载体的构建
2.2.2 JMB84-CMV-OVA-ob-poly A真核表达载体的构建
2.2.3 JMB84-CMV-OVA-ob-T2A-GFP-poly A真核表达载体构建及细胞表达
2.2.4 ob基因重组酵母的鉴定及制备
2.2.5 原核表达载体的构建以及重组leptin蛋白的纯化
2.3 试验结果
2.3.1 ob基因的扩增及JMB84-CMV-ob-poly A真核表达载体的构建
2.3.2 JMB84-CMV-OVA-ob-poly A真核表达载体的构建
2.3.3 JMB84-CMV-OVA-ob-T2A-GFP-poly A真核表达载体构建及细胞表达
2.3.4 ob基因重组酵母的鉴定及制备
2.3.5 原核表达载体的构建以及重组leptin蛋白的纯化
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 ob基因重组酵母的活体验证
3.1 试验材料
3.1.1 重组酵母
3.1.2 实验动物
3.1.3 试剂
3.1.4 试剂的配制
3.2 试验方法
3.2.1 实验动物分组
3.2.2 动物的免疫程序
3.2.3 实验动物体重及采食量分析
3.2.4 实验动物血液以及组织样品采集
3.2.5 血液中leptin抗体鉴定以及抗体效价比较
3.2.6 血液中leptin含量测定
3.2.7 总胆固醇和甘油三酯的测定
3.2.8 肝脏组织学分析
3.3 试验结果
3.3.1 正常组饲喂ob基因重组酵母的验证
3.3.2 高脂组饲喂ob基因重组酵母的验证
3.3.3 高脂-正常组饲喂ob基因重组酵母的验证
3.4 讨论
3.5 小结
结论
参考文献
致谢
个人简历
本文编号：4035634
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