糖化血红蛋白相关研究

发布时间：2017-05-29 16:10

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【摘要】：目的糖化血红蛋白(HbA1c)是监测糖尿病患者血糖长期控制情况的金标准,也是糖尿病诊断和观察治疗效果的重要标志物,已经被美国糖尿病协会(ADA)首先推荐为诊断糖尿病的新标准。而HbA1c的临床应用是基于实验室检测结果的准确一致。由于许多实验室间的HbA1c检测结果不一致,所以HbA1c检测结果的准确性和一致性一直是国际上的研究热点。许多因素可以影响HbA1c检测结果的准确性。本文旨在分析血红蛋白变异体对糖化血红蛋白检测结果的干扰及临床解决办法,同时探讨标本保存条件对Tosoh G7糖化血红蛋白分析仪测定结果稳定性的影响和新诊2型糖尿病患者糖化血红蛋白水平与颈动脉内中膜厚度相关性,为提高HbA1c检测结果的准确性和一致性及通过适时干预糖化血红蛋白的水平预防糖尿病患者心血管疾病的发生提供理论依据。方法1.收集糖化血红蛋白色谱图异常和HbA1c值与空腹血糖水平不相符的标本。患者焦某某,男,71岁,有2型糖尿病病史,门诊患者。血常规检查结果：RBC 4.25×1012/L, Hb132g/L, HCT39.8%, MCV93.6fl, MCH31pg, MCHC 332 g/L。生化检查结果：ALT 14.4 U/L, AST 22.4 U/L, Cre 70 μmol/L, UA397μ mol/L, BUN 5.7 mmol/L, FBG 6.0 mmol/L, HbAlc 4.0%。HbA1c色谱图有异常峰出现且HbAlc值低于正常范围。患者张某某,男,84岁,神经内科,住院患者。血常规检查结果：RBC 4.05 ×1012/L, Hb130g/L, HCT38.1%,MCV94.1fl, MCH32.1pg, MCHC341g/L。生化检查结果：ALT 14.4 U/L, AST 18.3 U/L, Cre 126 μmol/L, UA 502 μmol/L, BUN 10.4 mmol/L, FBG 6.48 mmol/L, HbA1c 4.4%。HbA1c色谱图有异常峰出现。患者花某某,女,51岁,有2型糖尿病病史,门诊患者。血常规检查结果：RBC 5.11 X 1012/L, Hb 154 g/L, HCT 48.0%, MCV 93.9 fl, MCH 30.1 pg, MCHC 321 g/L。生化检测结果：ALT 19.7 U/L, AST 24.3 U/L, Cre41 μmol/L, UA306 μmol/L, BUN 4.3 mmol/L, FBG 11.68 mmol/L, HbA1c 7.0%。出现HbA1c值与血糖水平不相符的情况。患者周某某,女,36岁,有2型糖尿病病史,门诊患者。血常规检查结果：RBC 4.11 ×1012/L, Hb 134 g/L, HCT 37.8%, MCV 92.0 fl, MCH 32.6 pg, MCHC 354g/L。生化检测结果：ALT 112.2 U/L, AST 11.6 U/L, Cre 51 μmol/L, UA 313 μmol/L, BUN 5.3 mmol/L, FBG 7.35 mmol/L, HbAlc 5.2%。HbA1c色谱图有异常峰在HbA0峰之后。2.血液生化指标检测：红细胞参数分析采用XE-5000全自动血细胞分析仪进行检测,生化参数分析采用Beckman AU5421全自动生化分析仪,HbA1c采用G7糖化血红蛋白分析仪,血红蛋白电泳采用法国Sebia全自动电泳仪。3.提取研究对象外周血全血细胞的DNA：取静脉全血400μL,根据Gentra Puregene Blood Kit血液DNA提取试剂盒提供的操作规程,提取外周全血细胞基因组DNA,置于-20℃环境中保存备用。4.PCR反应及基因分析：参考文献中的引物和条件,以提取的DNA为模板进行DNA扩增,扩增产物送往上海美吉生物技术有限公司进行双向测序(ASUApplier Biosysterms 2720)。测序结果与Genbank上已知序列进行比对分析。5.血红蛋白琼脂糖凝胶电泳：取EDTA-K2抗凝全血500μl,5000rpm离心5 min,除去血浆,用10倍生理盐水清洗红细胞2次(5000 rpm×5min),取10μl红细胞溶于130μl细胞裂解液,溶解后按照厂商给出的步骤行血红蛋白琼脂糖凝胶电泳,电泳图用氨基黑染液进行染色,观察有无异常血红蛋白区带。6.病例对照研究。选取南京市鼓楼医院2013年1月至2014年2月确诊的159例新诊2型糖尿病患者,按HbA1c数值分为A组(HbAlc≤7.0%, n=44), B组(7.0% HbA1c≤9.0%, n=58)和C组(HbA1c9.0%, n=57)。检测新诊2型糖尿病患者糖化血红蛋白、血脂水平,并对患者进行颈动脉超声检查。采用Pearson直线相关对HbA1c与各指标的相关性进行分析；采用单因素方差检验分析三组间的临床资料。同时采用logistic回归分析进行统计学分析。7.收集5例HbA1c水平不同的全血样本,用Tosoh G7糖化分析仪于当天3小时内测定其结果,每例样本充分混匀后分装成4小管,分组保存在室温(20～22℃)、冷藏(4-6℃)、低温冷冻(≤-20℃)和超低温冷冻(≤-74℃)条件下,并于保存的第2、5、6、7、14、20和21天及第2和6个月测定。每个样本的结果在超低温冷冻组均数±3SD或者±0.2%HbA1c范围内视为可接受。当每组5个样本的结果都在可接受范围内,说明样本在特定时间、特定温度下稳定。结果1.患者焦某某和张某某为Hb J-Bangkok,血红蛋白基因型为βN、βJBangko,患者华某某和周某某为Hb D-Los Angeles,血红蛋白基因型为βN/βD-Los Angeles。2. Hb J-Bangkok和Hb D-Los Angeles应用Tosoh G7糖化血红蛋白分析仪标准模式检测,导致HbA1c检测结果偏低。3.单因素方差分析显示,C组右CIMT、左CIMT、平均CIMT和最大CIMT水平高于B组和A组,差异有统计学意义。Logistic逐步回归分析显示年龄和HbA1c是最大CIMT的危险因素[年龄,风险比(OR)=1.103,95%置信区间(CI)=1.038-1.173, P0.05; HbA1c, OR=2.531,95%CI=1.558-4.111, P0.05]。4.标本用Tosoh G7糖化血红蛋白分析仪测定的稳定性分别为：室温和-18--20℃可稳定5d,4-6℃可稳定20d；-74--76℃至少可稳定180d。结论1.2种变异体Tosoh G7糖化血红蛋白分析仪HbA1c检测结果受干扰,而免疫比浊法HbA1c检测结果不受干扰。2.新诊2型糖尿病患者中,HbA1c水平与CIMT显著相关,HbA1c是最大CIMT增厚的独立危险因素,HbA1c水平升高与最大CIMT增厚显著相关。3.不同温度、不同贮存时间对Tosoh G7糖化血红蛋白分析仪测定HbA1c结果稳定性有影响。
【关键词】：糖化血红蛋白 Hb J-Bangkok Hb D-Los Angeles Tosoh G7糖化血红蛋白分析仪 新诊2型糖尿病患者 颈动脉内中膜厚度 时间 温度
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.1;R446.1
【目录】：

• 主要英文缩略词索引4-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-17
• 第一章 绪论17-23
• 1.1 研究背景17-18
• 1.2 国内外研究现状18-20
• 1.2.1 糖化血红蛋白结构及功能18
• 1.2.2 血红蛋白变异的概述18-19
• 1.2.3 糖化血红蛋白和颈动脉内中膜厚度的相关性19
• 1.2.4 标本贮存条件对检测HbA1c结果的影响19-20
• 1.3 研究的目的、方法、实验设计和意义20-23
• 1.3.1 研究目的20
• 1.3.2 研究方法20-21
• 1.3.3 实验方案21
• 1.3.4 研究意义21-23
• 第二章 Hb变异体对HbA1c检测结果的干扰及临床处理23-38
• 2.1 引言23
• 2.2 材料和方法23-31
• 2.2.1 材料23-26
• 2.2.2 方法26-31
• 2.3 结果31-36
• 2.3.1 HbA1c检测结果31-34
• 2.3.2 外周血全血细胞Hb电泳结果34
• 2.3.3 PCR反应扩增目的片段34-35
• 2.3.4 PCR产物测序图谱35-36
• 2.4 讨论36-38
• 第三章 新诊2型糖尿病患者HbA1c水平与CIMT相关性研究38-44
• 3.1 引言38
• 3.2 材料和方法38-40
• 3.2.1 材料38-39
• 3.2.2 方法39-40
• 3.3 结果40-42
• 3.3.1 HbA_(1c)与各指标的Pearson相关分析40
• 3.3.2 三组间临床资料比较40-41
• 3.3.3 危险因素分析41-42
• 3.4 讨论42-44
• 第四章 标本贮存条件对Tosoh G7测定HbA1c结果稳定性的影响研究44-49
• 4.1 引言44
• 4.2 材料和方法44-45
• 4.2.1 材料44
• 4.2.2 方法44-45
• 4.3 结果45-47
• 4.3.1 -74～-76℃贮存条件下HbA1c变化趋势45-46
• 4.3.2 其他贮存条件下HbA1c的稳定性46-47
• 4.4 讨论47-49
• 第五章 结论和创新49-50
• 5.1 结论49
• 5.2 创新49-50
• 参考文献50-56
• 致谢56-57
• 攻读硕士学位期间发表的文章与参加的学术会议57-58
• 一、攻读硕士学位期间发表的文章57
• 二、攻读硕士学位期间参加的学术会议57-58

【共引文献】

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1 王鹏鸽;基于苯硼酸的单糖和多巴胺电化学传感器研究[D];西北大学;2015年

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本文编号：405240