缺氧诱导因子1α-肾损伤分子1通路对高糖诱导肾小管上皮细胞细胞外基质的影响

发布时间：2017-07-28 15:00

  本文关键词：缺氧诱导因子1α-肾损伤分子1通路对高糖诱导肾小管上皮细胞细胞外基质的影响

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【摘要】：背景与目的糖尿病肾病(diabetic nephrophy, DN)是糖尿病(diabetic mellitus, DM)发病率较高的微血管并发症之一,同时也是导致终末期肾脏病(end stage renal disease, ESRD)的主要原因,而进行性肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)则是DN进展的重要病理基础。但其RIF的发生机制至今尚未完全阐明。因此,寻找更有效的预防糖尿病肾病的发生以及延缓其肾功能进展的措施已成为医学界亟待解决的问题。国内外相关研究表明,缺氧诱导因子la(hypoxia inducible factor, HIF1α)可与肾损伤分子1 (kidney injury molecule 1, KIM1)启动子区缺氧反应原件结合并激活KIM1的表达。HIF1α、KIM1均与糖尿病肾病等慢性肾脏疾病肾间质纤维化的发生密切相关。但DN中有关HIF1α-KIM1信号通路的相关研究甚少。本研究采用体外高糖培养人近端肾小管上皮细胞(human proximal tubular cell, HK2),观察HIF1α、KIM1及细胞外基质相关指标基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9, MMP9)、金属蛋白酶1组织抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP1)、纤连蛋白(fibronectin, FN)以及I型胶原蛋白(collgagen I,COL-I)的表达情况,并应用siRNA转染技术分别下调HIF1α、KIMl的表达后,观察细胞MMP9、TIMP1、FN及COL-I的变化,旨在探讨HIF1α-KIM1信号通路在糖尿病肾病RIF中的作用。方法体外培养HK2并进行如下分组：HK2于含10%FBS的低糖(D-葡萄糖5.6mmol/L)DMEM培养基,37℃、5%CO2贴壁培养。0.25%胰酶消化,1：3传代,待其生长至70%～80%融合时,使用无血清培养基同步12h后随机分为以下6组：(1)正常对照组；(2)甘露醇组；(3)高糖组；(4)转染对照组；(5)HIF1α siRNA组;(6)KIM1 siRNA组。(其中正常对照组培养条件为D-葡萄糖5.6mmol/L,甘露醇组培养条件为D-葡萄糖5.6 mmol/L+D-甘露醇24.4 nunol/L,高糖组培养条件为D-葡萄糖30 mmol/L)。分别于12h、24h、36 h各时间点收获细胞。分别于不同培养时间条件下进行测定。应用Western印迹法、实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)和细胞免疫荧光方法检测细胞HIF1α、KIM1、MMP9、TIMP1、FN及COL-I的蛋白及mRNA表达。结果与正常对照组相比,高糖组细胞HIF1α、KIM1、TIMP1、FN及COL-I的蛋白及mRNA表达呈时间依赖性增加(P0.05)；MMP9蛋白及mRNA表达呈时间依赖性减少(P0.05)；与高糖组相比,HIF1α siRNA组细胞HIF1α、KIM1、 TIMP1、FN及COL-I的蛋白及mRNA表达明显减少(P0.05),MMP9蛋白及mRNA表达明显增多(P0.05)；与高糖组相比,KIM1 siRNA组细胞KIM1、TIMP1、FN及COL-I蛋白及mRNA表达明显减少(P0.05),MMP9蛋白及mRNA表达明显增多(P0.05),而HIF1α表达水平无明显变化(P0.05)。结论高糖环境下HIF1α可能通过调控肾小管上皮细胞KIM1的表达参与糖尿病肾病肾间质纤维化的进程。
【关键词】：糖尿病肾病 肾小管上皮细胞 细胞外基质 氧诱导因子1α 肾损伤分子1
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692.9;R587.2
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文缩略词索引9-10
• 第一章 引言10-13
• 第二章 材料和方法13-29
• 第三章 实验结果29-37
• 第四章 讨论37-40
• 第五章 结论40-41
• 参考文献41-47
• 综述-糖尿病肾病相关分子和信号通路的研究进展47-65
• 参考文献56-65
• 个人简历及在校期间发表的学术论文65-66
• 致谢66

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