rSjFBPA和rSjCystatin对NOD小鼠1型糖尿病的干预

发布时间：2017-07-28 18:10

  本文关键词：rSjFBPA和rSjCystatin对NOD小鼠1型糖尿病的干预

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【摘要】：目的1型糖尿病(T1DM)是以T细胞介导的特异性胰岛β细胞损伤为特征的自身免疫性疾病,大量的研究已经证实,多数慢性器官特异性损伤的自身免疫性疾病都与Th1/Th2免疫失衡、调节性T细胞(CD4+CD25+highFox P3+,Treg)和Th17异常增殖有关。此外,也有研究报道,蠕虫感染、虫体或虫卵的抗原免疫能够诱导调节T细胞和Th2细胞的增殖,可以阻止或减轻自身免疫病的发生,在T1DM动物模型试验中同样取得满意的结果。本研究拟利用从血吸虫成虫已筛选和鉴定出的Th2型优势应答的免疫调节分子重组日本血吸虫果糖二磷酸醛缩酶(rSjFBPA)和半胱氨酸蛋白酶抑制剂(rSjCystatin),在NOD小鼠糖尿病发生前进行干预,评估免疫后NOD小鼠糖尿病发生及发展情况,观察干预后NOD小鼠体内Th1、Th2、Th17和Treg细胞以及相应细胞因子的水平,阐明重组抗原的免疫调节机制,为糖尿病的预防和治疗开辟新的途径。方法将4w龄NOD小鼠随机分成三组,每周分别用相同剂量或体积的PBS(100μl/只)、rSjFBPA(50μg/只)和rSjCystatin(50μg/只)腹腔注射,连续注射四周。为了加速NOD小鼠T1DM的发生,在小鼠7w龄和9w龄时用200g/kg环磷酰胺作两次大剂量腹腔注射。小鼠从第四周开始每周检测一次血糖和体重。在第二次注射环磷酰胺3周后将小鼠麻醉处死,取胰腺进行HE染色和免疫组化检测胰岛素分泌情况,观察小鼠胰腺的β细胞数量和胰小岛等病理变化,评估糖尿病的发生和发展情况。分离免疫小鼠的脾脏单个核细胞,体外PMA和离子霉素重新刺激,收集培养细胞和培养上清,分别用Real-time PCR、FCM、ELISA检测Th1、Th2、Treg和Th17细胞增殖及相关细胞因子表达情况,比较PBS对照组与rSjFBPA和rSjCystatin干预后NOD小鼠糖尿病的发生和发展情况。结果相对于PBS处理组,rSjFBPA和rSjCystatin处理组的NOD小鼠T1DM的发病率明显减少,平均血糖水平明显降低,并且发病时间也有明显延迟,体重明显增加;rSjFBPA和rSjCystatin处理组的胰腺组织HE染色和免疫组化也显示了炎症浸润减轻、胰岛功能保留相对较好。Real-time PCR、FCM和ELISA测定的Th1、Th2、Th17和Treg细胞以及相应细胞因子水平结果表明,以IL-4为代表的Th2和以IL-10和TGF-β为代表的Tregs上调,而以IFN-γ为代表的Th1下调,差异均有统计学意义,以IL-17A为代表的Th17无明显变化,差异无统计学意义。结论rSjFBPA和rSjCystatin重组蛋白可以预防或延缓NOD小鼠T1DM的发生、减轻NOD小鼠T1DM的病理发展,因此,rSjFBPA或rSjCystatin可能是类似T1DM等以Th1为优势应答的自身免疫性疾病的潜在的新药物。
【关键词】：T1DM 日本血吸虫 rSjFBPA rSjCystatin 免疫调节
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.1
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 1. 前言9-11
• 2. 材料与方法11-21
• 3. 结果21-28
• 4. 讨论28-30
• 5. 结论30
• 参考文献30-34
• 致谢34-35
• 附录35-49
• 附录A 英文缩略词对照表35-37
• 附录B 综述37-48
• 参考文献41-48
• 附录C 个人简介48-49

【参考文献】

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1 董光富,叶任高,史伟,刘双信,汪涛,阳晓,杨念生,余学清;IL-17 induces autoantibody overproduction and peripheral blood mononuclear cell overexpression of IL-6 in lupus nephritis patients[J];Chinese Medical Journal;2003年04期

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本文编号：585336