大鼠ASIC1基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其功能鉴定

发布时间：2017-07-30 15:02

  本文关键词：大鼠ASIC1基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其功能鉴定

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【摘要】：目的构建大鼠酸敏感离子通道1(ASIC1)基因启动子荧光素酶报告质粒pGL3-ASIC1-promoter,并进行功能的鉴定。方法设计、合成ASIC1启动子引物,采用聚合酶链反应(PCR)技术从大鼠全基因组DNA中扩增出ASIC1启动子片段;NheⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pGL3-Basic报告载体上;构建的pGL3-ASIC1-promoter重组质粒和pRLTK内参质粒瞬时共转染293T细胞检测ASIC1启动子活性。结果 PCR扩增得到大鼠ASIC1基因启动子片段;成功构建pGL3-ASIC1-promoter报告基因载体,菌落PCR和测序结果表明启动子DNA序列正确。与空质粒pGL3-Basic转染组相比,pGL3-ASIC1-promoter质粒转染组的荧光素酶活性明显增加(P0.01)。结论成功构建了大鼠ASIC1基因启动子报告基因载体,为探究ASIC1转录表达的调控机制奠定基础。
【作者单位】： 安徽医科大学药学院;
【关键词】： ASlC 启动子 荧光素酶 报告基因
【基金】：国家自然科学基金(编号:81271949)
【分类号】：R593.22
【正文快照】： 酸敏感离子通道(acid sensing ion channels, ASICs)是一类胞外H+激活的阳离子通道,属于阿米洛利敏感的上皮钠通道/退变素(epithelial Na+channels/degenerin,ENaC/DEG)超家族,广泛地表达在中枢和外周神经系统以及非神经组织中,通过介导Na+和Ca2+内流参与各种病理生理效应⑴

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本文编号：594762