大鼠急性CO中毒后迟发性脑病模型中海马区缺氧诱导因子1α及血红素加氧酶1的表达

发布时间：2017-08-05 10:16

  本文关键词：大鼠急性CO中毒后迟发性脑病模型中海马区缺氧诱导因子1α及血红素加氧酶1的表达

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【摘要】：目的:建立急性CO中毒后迟发性脑病大鼠模型,通过对其行为学的分析、脑组织海马区缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及血红素加氧酶1(HO-1)的表达变化及相关性分析,初步探讨以上两种蛋白可能的致病机制,为进一步研究DEACMP发病机制提供实验基础和参考。方法:1、大鼠经过初筛后,将156只健康雄性SPF级SD大鼠(体重280~320g)按随机数表法抽样并分成三组:急性CO中毒后迟发性脑病组(CO组)及空气对照组(AC组)各60只、空白对照组(BC组)36只。再将其随机分配于染毒后1d、3d、7d、14d、21d、28d共6个时间点的亚组中,CO组及AC组每个亚组10只,BC组每个亚组6只。2、CO组采用改良式多次间隔腹腔注射CO法建立DEACMP动物模型,AC组予以相同的方法注射空气,BC组不做处理。3、通过Morris水迷宫实验检测大鼠染毒前后其记忆、认知功能的变化,同时心脏取血测定HbCO浓度,初步判断造模是否成功;HE染色检测大鼠海马区细胞的形态学改变;TUNEL染色检测大鼠海马CA1区的细胞凋亡;普鲁士蓝染色检测海马区铁离子的表达;免疫组化法初步检测海马区脑组织HIF-1α及HO-1的表达,蛋白质印迹法(Western Blotting)半定量检测大鼠海马HO-1的表达。4、实验数据采用SPSS17.0统计学软件进行分析。结果:1、DEACMP动物模型:CO组大鼠中毒数分钟后逐渐出现四肢无力,运动迟缓,少动,一过性瘫痪,呼吸深大、急促,口唇黏膜呈现樱桃红色,部分大鼠出现肌肉强直,肢体抽搐甚至昏迷、死亡。存活的co组大鼠较另两组进食减少,易激惹,反应欠灵敏。ac组及bc组大鼠无明显变化。2、动脉血hbco浓度变化:在整个染毒过程中,大鼠体内hbco浓度50%持续维持超过16h。3、morris水迷宫实验:三组大鼠在染毒前及染毒后7d的组间及组内比较平均逃避潜伏期、穿越平台所在象限总时间及穿越平台次数差异均无统计学意义,而染毒后14d、21d、28d,co组平均逃避潜伏期延长,穿越平台所在象限总时间缩短、穿越平台次数减少,组内比较及与另两组比较差异具有显著统计学意义(p0.05)。4、he染色:co组可见大鼠海马ca1区细胞排列不规则,层次不清,锥体细胞数量变少,细胞间隙增宽,细胞核逐渐碎裂、固缩,细胞肿胀,甚至发生变性,坏死等。ac组及bc组海马ca1区锥体细胞未见明显异常。5、普鲁士蓝染色:镜下可见在co组中,铁离子在染毒后1d时表达增加,3d达高峰,之后逐渐降低的趋势。ac组及bc组未见明显铁离子表达。6、tunel染色:co组染毒后海马区凋亡细胞数量呈逐渐增加的趋势,7d时达峰值,之后逐渐下降,28d时仍高于ac组及bc组,差异具有统计学意义(p0.05)。ac组及bc组各时间点均未见明显细胞凋亡。7、hif-1α及ho-1蛋白的表达:(1)免疫组化法:co组hif-1α及ho-1的表达从1d至28d呈现先增高,于3d时达峰值,然后逐渐降低的趋势,至28d时仍高于ac组及bc组,而ac组及bc组中hif-1α及ho-1的表达无明显变化。(2)蛋白质印迹法(westernblotting):co组大鼠海马ho-1蛋白表达量于1d时增高,3d时达高峰,之后逐渐降低,至28d时仍高于第1d时水平,而在AC组及BC组大鼠海马的表达量均较少。结论:1、改良式多次间隔腹腔注射CO染毒法操作简便易行,所需仪器常见,CO用量少,且易于掌控,不易浪费及污染,可达到其他(如吸入式)模型所具备的条件,是较接近临床实际的理想模型。2、Morris水迷宫实验通过对大鼠染毒前后记忆及认知功能的变化比较,并通过检测中毒大鼠动脉血HbCO浓度变化,对比中毒大鼠的行为变化等方面可初步判定DEACMP模型是否建立成功。3、急性CO中毒后海马区HIF-1α表达增加,促进下游因子HO-1的表达增加,两者协同促进海马区细胞迟发性凋亡的发生可能是DEACMP的发病机制之一。
【关键词】：急性CO中毒 迟发性脑病 迟发性细胞凋亡 HIF-1α HO-1
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R595.1;R-332
【目录】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-10
• 前言10-13
• 材料与方法13-26
• 结果26-51
• 讨论51-61
• 结论61-62
• 参考文献62-71
• 英汉缩略词对照表71-74
• 致谢74-75
• HO-1 在急性CO中毒后迟发性脑病发病机制中的相关研究进展 综述75-87
• 参考文献83-87

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