MiR-216b靶向抑制ABCG1表达对破骨细胞分化、融合及生存的影响

发布时间：2017-08-11 12:36

  本文关键词：MiR-216b靶向抑制ABCG1表达对破骨细胞分化、融合及生存的影响

  更多相关文章： miR-216b ABCG1 破骨细胞 胆固醇流出

【摘要】：目的:探讨miR-216b是否能通过靶向作用于ABCG1 3'UTR并抑制其表达,观察过表达或沉默miR-216b后对破骨细胞分化、融合、生存的影响及相关机制。方法:应用生物学信息分析网(microRNA.org)及在线软件寻找与ABCG1能靶向结合的Micro RNAs,分析与预测各物种间miR-216b的保守性、靶基因、ABCG1 3'UTR序列及miR-216b ABCG1结合自由能、结合位点等基本信息。不同浓度(0、10、20、40、80nm)miR-216b mimics或miR-216b inhibitor及不同时间(0、12、24、48h)处理细胞,通过TRAP染色检测破骨细胞生成情况,计算TRAP阳性成熟破骨细胞数目、直径及融合核数目;实时定量PCR检测ABCG1 m RAN表达水平,Western blot检测ABCG1蛋白质表达水平。miR-216b mimics、miR-216b inhibitor或miR-216b inhibitor+ABCG1 si RNA转染细胞48h后,通过TRAP染色检测破骨细胞生成情况,计算TRAP阳性成熟破骨细胞数目、直径及融合核数目;实时定量PCR检测ABCG1 m RAN表达水平,Western blot检测ABCG1蛋白质表达水平,液体闪烁计数仪检测其胆固醇流出情况。结果:生物学信息分析网及在线软件分析结果显示miR-216b在多物种间具有高度保守性,多个靶标预测网站发现miR-216b能与ABCG1 3'UTR发生靶向结合并调控其靶标基因的表达。miR-216b能抑制ABCG1蛋白及m RNA的表达,且对ABCG1蛋白表达的调节具有时间与浓度依赖性,进而增加破骨细胞数目、直径、融合核数目,促进RAW264.7巨噬细胞向破骨细胞分化、融合及其生存。miR-216b inhibitor能上调ABCG1蛋白及m RNA的表达,且对ABCG1蛋白表达的调节具有时间与浓度依赖性,进而减少破骨细胞数目、直径、融合核数目,抑制RAW264.7巨噬细胞向破骨细胞分化、融合及其生存。miR-216b inhibitor与ABCG1 si RNA同时处理细胞后,证实miR-216b通过下调细胞内ABCG1蛋白表达,减少细胞内胆固醇流出。结论:miR-216b通过靶向抑制ABCG1的表达减少破骨细胞内胆固醇流出,促进破骨细胞分化、融合及生存。
【关键词】：miR-216b ABCG1 破骨细胞 胆固醇流出
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R580
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 引言11-15
• 第2章 实验材料15-19
• 2.1 主要实验试剂15-16
• 2.2 主要实验器材16-17
• 2.3 microRNA公共数据库及在线软件17-19
• 第3章 实验方法19-29
• 3.1 细胞培养（RAW264.7/HEK293T）19-20
• 3.2 诱导分化及细胞转染miR-216b mimics/inhibitor及ABCG1siRNA20-21
• 3.3 细胞总蛋白的提取21
• 3.4 实时定量PCR21-22
• 3.5 Western blot22
• 3.6 抗酒石酸酸性磷酸酶染色22-23
• 3.7 胆固醇流出检测23
• 3.8 高效液相色谱法检测细胞内胆固醇23-24
• 3.9 生物信息学预测24-27
• 3.10 统计学分析27-29
• 第4章 实验结果29-53
• 4.1 生物信息学预测提示miR-216b能靶向作用于ABCG1 mRNA3′UTR29-33
• 4.2 不同浓度的miR-216b能下调破骨细胞内ABCG1表达及促进破骨细胞形成、分化及融合33-37
• 4.3 不同浓度的miR-216b inhibitor能上调破骨细胞内ABCG1表达及抑制破骨细胞形成、促进其凋亡37-42
• 4.4 miR-216b mimics/inhibitor处 理不同时间对破骨细胞内ABCG1表达及破骨细胞形成、分化及融合的影响42-47
• 4.5 miR-216b通过靶向抑制ABCG1表达，，减少胞内胆固醇流出，促进破骨细胞形成、融合及生存47-53
• 第5章 讨论53-57
• 第6章 结论57-59
• 参考 文献59-63
• 主要英文缩略语索引63-65
• 文献综述 高脂血症与骨质疏松65-75
• 参考文献70-75
• 攻读学位期间所获科研成果75-77
• 致谢77-78
• 基金78

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张晔,吴小涛;破骨细胞分化中的信号环路与调节[J];中国骨质疏松杂志;2001年03期

2 袁成良,金小岚;破骨细胞分化成熟调节的分子机理研究进展[J];中国病理生理杂志;2003年03期

3 王松;沈霖;;破骨细胞分化、形成过程中表现型特点[J];武汉体育学院学报;2007年04期

4 李忠武,章明放;白细胞介素对破骨细胞分化与功能调控研究的进展[J];中国骨质疏松杂志;2003年01期

5 孟祥阁;;破骨细胞分化的信号转导系统[J];科协论坛(下半月);2009年01期

6 陈莉;Bronwen Evans;Daniel Aeschlimann;;白介素-23对破骨细胞分化及功能直接调节作用的实验研究[J];北京口腔医学;2010年06期

7 张晔;;破骨细胞分化过程中的信号传导[J];国外医学(老年医学分册);2001年02期

8 刘瑞;戴晨琳;郑纺;郭善一;王宝利;邱明才;;破骨细胞抑制性凝集素胞外段可抑制骨髓干细胞向破骨细胞分化[J];天津医药;2010年08期

9 张超;孙新华;;物理因素对破骨细胞分化及功能的影响[J];中国骨与关节外科;2012年03期

10 王静;侯旭;孙新华;;CpG ODN对破骨细胞分化调控作用的研究进展[J];现代生物医学进展;2011年17期

中国重要会议论文全文数据库 前7条

1 陈晓;朱国英;顾淑珠;邱晶;;低剂量镉暴露刺激破骨细胞分化[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年

2 王军;赵志河;罗颂椒;;张应力刺激对成骨细胞调控破骨细胞分化成熟效应的影响[A];第四军医大学口腔医院2004第七届全国口腔正畸学术会议论文汇编[C];2004年

3 贾鹏;徐又佳;;铁离子对破骨细胞分化及骨吸收的影响[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年

4 郭勇;郭春;张西正;闫玉仙;李瑞欣;张春秋;王亮;;相同机械应力对成骨细胞分化和破骨细胞分化的影响[A];天津市生物医学工程学会第30次学术年会暨生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2010年

5 许多荣;苏畅;邹外一;;RANK可能通过新的信号途径调节破骨细胞分化[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

6 赵国阳;徐又佳;狄东华;;高铁环境对成骨细胞、破骨细胞分化的影响[A];中华医学会第七次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议论文汇编[C];2013年

7 许多荣;许辉茹;王荷花;李娟;;不同浓度的地塞米松体外对人的成骨细胞及破骨细胞分化的影响[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 王洪凯;喹硫平抑制破骨细胞分化的作用观察及机制研究[D];第三军医大学;2015年

2 宋瑞龙;OPG对破骨细胞分化过程中细胞骨架的影响及其分子机理[D];扬州大学;2014年

3 熊琦;蛋白质组学在破骨细胞分化形成机制研究中的应用[D];中国人民解放军医学院;2016年

4 杜少华;miR-146a调控破骨细胞分化以及在老年性骨质疏松症中的作用机制研究[D];浙江大学;2016年

5 魏明;MOTS-c对OVX小鼠脂代谢异常和骨丢失的保护效能与机制研究[D];第四军医大学;2016年

6 许琰;新型抗氧化蛋白PAMM及其在破骨细胞分化和雌激素缺乏所致骨质疏松中的作用[D];昆明医科大学;2016年

7 王晨;重组腺病毒介导siCXCR2抑制磨损颗粒诱导破骨细胞分化成熟的作用[D];重庆医科大学;2016年

8 曹惠玲;转录调节因子ATF4对破骨细胞分化的调节[D];天津医科大学;2010年

9 马静;转录因子RBP-J对小鼠破骨细胞分化及功能的调控作用研究[D];第四军医大学;2012年

10 雷丹丹;miR-125a在破骨细胞分化过程中的作用及其机制研究[D];中南大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 常亮;C-2，C-3并吡唑白桦脂酸水溶性衍生物的设计、合成及其抑制破骨细胞分化成熟活性研究[D];华东师范大学;2014年

2 正王宇;瘦素通过抑制PPARγ的表达抑制RAW264.7细胞向破骨细胞分化[D];重庆医科大学;2015年

3 高倩;OPG对破骨细胞分化的影响及其Rho信号转导机制[D];扬州大学;2015年

4 朱云;小鼠MafB过表达对单核细胞向破骨细胞分化的影响[D];重庆医科大学;2015年

5 王静;NRAGE对破骨细胞分化的调控作用及机制研究[D];南京师范大学;2013年

6 彭秋月;雷公藤红素通过调控选择素-P的表达抑制破骨细胞分化的研究[D];南京医科大学;2016年

7 杨五洲;MiR-216b靶向抑制ABCG1表达对破骨细胞分化、融合及生存的影响[D];南华大学;2016年

8 贾鹏;铁离子对破骨细胞分化及骨吸收影响的机理研究[D];苏州大学;2012年

9 谢娟;中草药单体黄腐酚抑制破骨细胞分化及其功能的机制研究[D];湖南师范大学;2012年

10 王胜利;脂多糖对体外诱导培养的小鼠破骨细胞分化和活性的影响[D];河南大学;2014年

本文编号：656179