促红细胞生成素对高糖诱导人肾小球系膜细胞纤维化的影响及其可能机制研究
本文关键词：促红细胞生成素对高糖诱导人肾小球系膜细胞纤维化的影响及其可能机制研究
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【摘要】：目的:研究促红细胞生成素(EPO)对高糖培养人肾小球系膜细胞(MCs)表达相关细胞因子、炎症因子及其增殖的影响,探索EPO对肾组织的分子生物学效应。方法:2014年12月—2015年5月选取人MCs,采用随机数字表法将MCs分为:空白对照组、高糖诱导组、甘露醇对照组、EPO对照组、5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组、Rho激酶抑制剂组,培养24 h。采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测RhoA、锌离子相关的RhoA蛋白1(ROCK1)mRNA表达水平;酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅳ型胶原蛋白、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平;CCK-8法测定细胞增殖吸光度(OD值)。结果:高糖诱导组较空白对照组RhoA、ROCK1 mRNA表达水平升高(P0.05);5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组较高糖诱导组RhoA、ROCK1 mRNA表达水平降低(P0.05);5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组RhoA、ROCK1 mRNA表达水平组间两两比较,差异均有统计学意义(P0.05);Rho激酶抑制剂组较高糖诱导组、5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组RhoA、ROCK1 mRNA表达水平降低(P0.05)。高糖诱导组、5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组RhoA mRNA表达水平与ROCK1 mRNA表达水平均呈正相关(r值分别为0.829、0.898、0.831、0.861,P0.05)。高糖诱导组较空白对照组培养24 h时CTGF及Ⅳ型胶原蛋白、培养24 h及48 h时IL-6及TNF-α表达水平升高(P0.05);5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组、Rho激酶抑制剂组较空白对照组培养24 h时CTGF及Ⅳ型胶原蛋白、培养24 h及48 h时IL-6及TNF-α表达水平升高,较高糖诱导组降低(P0.05);10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组、Rho激酶抑制剂组较5 U/ml EPO干预组培养24 h时CTGF及Ⅳ型胶原蛋白、培养24 h及48 h时IL-6及TNF-α表达水平降低(P0.05);20 U/ml EPO干预组、Rho激酶抑制剂组较10 U/ml EPO干预组培养24 h时CTGF及Ⅳ型胶原蛋白、培养24 h及48 h时IL-6及TNF-α表达水平降低(P0.05)。培养24、48、72 h时,高糖诱导组、EPO对照组、5U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组较空白对照组MCs增殖OD值升高,Rho激酶抑制剂组较空白对照组MCs增殖OD值降低(P0.05);5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组较高糖诱导组MCs增殖OD值升高,Rho激酶抑制剂组较高糖诱导组MCs增殖OD值降低(P0.05);5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组MCs增殖OD值组间两两比较,差异均有统计学意义(P0.05);3组MCs增殖OD值培养24、48、72 h时间间两两比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:1、高糖可抑制人MCs增殖。2、在一定浓度范围内,EPO呈浓度依赖性地抑制MCs凋亡从而发挥肾脏保护作用。3、EPO可通过减少MCs CTGF和Ⅳ型胶原蛋白的表达,缓解DN肾间质纤维化的发展。4、EPO可通过减少炎症因子的产生,抑制炎性反应,延缓DN肾纤维化进展。5、EPO对高糖环境下体外培养的MCs细胞的保护作用可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。
【关键词】：促红细胞生成素 糖尿病肾病 肾小球系膜细胞 纤维化 细胞增殖 Rho A/ROCK信号通路
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：
- 摘要3-5
- ABSTRACT5-9
- 中英文缩略词表9-10
- 第1章 引言10-12
- 第2章 材料与方法12-22
- 2.1 实验材料12-14
- 2.1.1 实验主要仪器12
- 2.1.2 实验用MCs来源12
- 2.1.3 实验用主要试剂12-13
- 2.1.4 主要试剂配制13
- 2.1.5 引物合成13-14
- 2.2 实验方法及步骤14-21
- 2.2.1 MCs的培养14-16
- 2.2.2 实验分组16
- 2.2.3 RT-PCR法检测各组细胞RhoAmRNA、ROCK1 mRNA表达水平16-19
- 2.2.4 ELISA法检测各组MCs上清液CTGF、Ⅳ型胶原蛋白、IL-6、TNF-α蛋白的表达水平19-20
- 2.2.5 CCK-8 法检测各组细胞增殖情况20-21
- 2.3 统计学方法21-22
- 第3章 结果22-31
- 3.1 MCs细胞形态学结果22
- 3.2 高糖、EPO对MCs RhoAmRNA、ROCK1mRNA表达水平的影响22-24
- 3.2.1 RNA完整性检测22-23
- 3.2.2 RT-PCR检测结果23-24
- 3.3 高糖、EPO、Y27632对MCs的CTGF、Ⅳ型胶原蛋白表达影响24-26
- 3.4 高糖、EPO、Y27632对MCs IL-6、TNF-α 表达影响26-28
- 3.5 高糖、EPO、Y27632对MCs增殖的影响28-30
- 3.6 RhoA mRNA表达水平与ROCK1 mRNA表达水平相关性分析30-31
- 第4章 讨论31-36
- 4.1 MCs纤维化与DN31-32
- 4.2 EPO对高糖诱导MCs纤维化过程的抑制作用32-34
- 4.2.1 EPO对MCs纤维化过程中RhoA/ROCK信号通路的影响32-33
- 4.2.2 EPO对MCs纤维化过程中CTGF及Ⅳ型胶原蛋白的影响33-34
- 4.4 EPO对MCs纤维化过程中炎症因子的影响34
- 4.5 EPO对高糖诱导MCs增殖的作用34-36
- 第5章 结论与展望36-37
- 5.1 结论36
- 5.2 不足与展望36-37
- 致谢37-38
- 参考文献38-42
- 附图42-43
- 攻读学位期间的研究成果43-44
- 综述44-48
- 参考文献47-48
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2 徐e，
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