早期糖尿病大鼠视网膜中蛋白激酶C与内皮素系统、核因子-kB的相关性研究

发布时间：2017-09-07 09:06

  本文关键词：早期糖尿病大鼠视网膜中蛋白激酶C与内皮素系统、核因子-kB的相关性研究

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【摘要】：目的:观察在糖尿病早期阶段视网膜内蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)活性及各亚型蛋白表达的情况,并连续动态观察糖尿病早期状态下视网膜内皮素(endothelin,ET)系统及核因子-Kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-k B)的表达变化。观察非选择性PKC抑制剂GF109203X对视网膜内ET系统及NF-k B表达的影响,以探讨PKC在糖尿病早期诱导视网膜细胞损伤的作用机制。方法:采用Sprague Dawley(SD)大鼠为实验对象,使用一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方法诱导糖尿病大鼠动物模型。酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunoabsorbent assay,ELISA)检测12周病程的糖尿病大鼠视网膜内PKC活性。免疫印迹法(western blottiog,WB)检测12周病程的糖尿病大鼠视网膜内相关PKC亚型的蛋白表达情况。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法(quantitative real time-polymerase chain reaction,QRT-PCR)检测不同病程的糖尿病大鼠视网膜ET系统和NF-k B p65 m RNA的表达情况。对12周病程的糖尿病大鼠玻璃体腔内注射不同浓度(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)的非选择性PKC抑制剂后,运用QRT-PCR检测ET系统及NF-k B m RNA表达的变化。结果:1、12周病程的糖尿病大鼠视网膜组织内细胞膜组份的PKC活性较正常对照组明显增加,差异有统计学意义(P0.05),细胞浆组份的PKC活性无明显变化(P0.05)。2、12周病程的糖尿病大鼠视网膜中,PKC-α、β1、β2、δ表达较正常对照组增多,差异均有统计学意义(P0.05),其中以PKC-β1、β2最为明显,PKC-ε无明显变化(P0.05)。3、在糖尿病早期大鼠视网膜组织内ETs及NF-k B的m RNA表达均较正常对照组明显增加,其中ET-1及NF-k B在2周既已出现明显升高,ET-3及ET-A在第4周检测出m RNA表达水平的升高,而ET-B m RNA的升高出现在第12周,差异均有统计学意义(P0.01)。4、对12周病程的糖尿病大鼠进行玻璃体注射10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L的PKC抑制剂后,视网膜内ETs及NF-k B p65 m RNA表达均不同程度的降低,且呈剂量依赖性反应,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:1、在糖尿病早期大鼠视网膜组织内即已出现PKC的激活及ETs、NF-k B表达的增加。2、PKC抑制剂GF103209X可不同程度地降低视网膜内ETs及NF-k B的表达,且成剂量依赖性反应。3、在糖尿病早期阶段PKC可能通过破坏ET系统及NF-k B的平衡状态从而诱导早期糖尿病视网膜细胞的损伤。
【关键词】：糖尿病视网膜病变 蛋白激酶C 内皮素系统 核因子-kB
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R774.1
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-11
• 第1章 引言11-15
• 第2章 材料与方法15-29
• 2.1 主要材料与试剂15-17
• 2.1.1 实验动物15
• 2.1.2 主要试剂和产地15-16
• 2.1.3 主要仪器设备和产地16-17
• 2.2 实验方法17-29
• 2.2.1 常用试剂的配制17-19
• 2.2.2 糖尿病大鼠模型的建立19
• 2.2.3 ELISA测定视网膜内PKC活性19-21
• 2.2.4 Western Blot测定视网膜内PKC亚型21-24
• 2.2.5 视网膜HE染色24-25
• 2.2.6 QRT-PCR检测视网膜内ET系统及NF-k B的mRNA表达水平25-27
• 2.2.7 PKC抑制剂GF109203X干预27-28
• 2.2.8 统计方法28-29
• 第3章 结果29-35
• 3.1 组间基本情况的比较29-30
• 3.2 视网膜HE染色结果30-31
• 3.3 PKC活性的比较31
• 3.4 PKC亚型的表达情况31-32
• 3.5 不同时间点视网膜内ETs及NF-k B p65 mRNA的表达情况32-34
• 3.6 不同剂量GF109203X处理后ETs及NF-k B p65 mRNA的表达34-35
• 第4章 讨论35-42
• 4.1 PKC与早期糖尿病视网膜35-37
• 4.1.1 DAG/PKC信号通路35-36
• 4.1.2 PKC在早期糖尿病视网膜病变化36-37
• 4.2 PKC、ET系统与早期糖尿病视网膜37-38
• 4.3 PKC、NF-k B与早期糖尿病视网膜38-40
• 4.3.1 NF-k B38-39
• 4.3.2 PKC对早期糖尿病视网膜组织中NF-k B的影响39-40
• 4.4 总结40
• 4.5 本研究的创新之处40
• 4.6 本研究的不足之处40-42
• 第5章 结论与展望42-43
• 5.1 结论42
• 5.2 展望42-43
• 致谢43-44
• 参考文献44-50
• 附图50-53
• 攻读学位期间的研究成果53-54
• 综述 糖尿病视网膜病变的系统综合性治疗进展54-64
• 参考文献60-64

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本文编号：808628